PF-3644022

PF-3644022 es un potente inhibidor ATP-competitivo libremente reversible de MAPKAPK2 (MK2) con un Ki de 3 nM. Este compuesto también inhibe potentemente la producción de TNFα con un IC50 de 160 nM.

PF-3644022 es un potente compuesto ATP-competitivo libremente reversible que inhibe la actividad de la proteína cinasa activada por MAP cinasa 2 (MK2) con buena selectividad cuando se perfila contra 200 cinasas humanas. En la línea celular monocítica humana U937 o en las células mononucleares de sangre periférica, este compuesto inhibe potentemente la producción de TNFα con actividad similar. Bloquea la producción de TNFα e IL-6 en sangre total humana estimulada por LPS.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

PF-3644022 muestra buenos parámetros farmacocinéticos en ratas y es eficaz por vía oral tanto en el modelo de TNFα inducido por LPS agudo en ratas como en el modelo de artritis crónica inducida por la pared celular estreptocócica, con valores de ED50 de 6.9 y 20 mg/kg, respectivamente.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

• Ensayos de cinasa in vitro y cinética de inhibición.

  La actividad cinasa de MK2 se analiza utilizando un péptido de proteína de choque térmico 27 (HSP27) marcado fluorescentemente y un Caliper LabChip 3000. El péptido fosforilado se separa del péptido sustrato electroforéticamente y se cuantifica. Todas las reacciones de cinasa se realizan a temperatura ambiente en 20 mM HEPES, que contiene 10 mM MgCl2, 1 mM ditiotreitol, 0.01% de albúmina sérica bovina y 0.0005% de Tween 20, pH 7.5. Para los experimentos de punto final, las reacciones se terminan durante la fase lineal mediante la adición de 30 mM de EDTA. Los experimentos de selectividad de cinasa se realizan con la concentración de MgATP fijada en el Km(app) determinado para cada enzima. La velocidad inicial se determina en presencia y ausencia de este compuesto con ATP como sustrato variado mientras la concentración del péptido HSP27 se mantiene constante.

• Líneas celulares

  Human U937 monocytic cell line, hPBMCs

• Concentraciones

  0.1 nM-100μM

• Tiempo de incubación

  1 h

• Método

  U937 cells and hPBMCs are pretreated with PF-3644022 at varying concentrations for 1 h before LPS stimulation at 100 ng/ml. TNFα levels in U937 cell are measured at 4 h after LPS stimulation by using an electrochemoluminescence MesoScale Discovery TNF kit. In hPBMCs, TNFα and IL-6, IL-8 are measured at 16 h after LPS stimulation by using a four-plex human cytokine MSD plate.

• Modelos animales

  LPS-induced acute endotoxemia inflammation model (adult male Lewis rats), chronic streptococcal cell wall-induced arthritis model (female Lewis rats)

• Dosificaciones

  1 mg/kg

• Administración

  Oral gavage