PF-04691502

PF-04691502 inhibe potentemente la PI3K de clase I recombinante y mTOR en ensayos bioquímicos y suprime la transformación de fibroblastos aviares mediada por PI3K γ o δ de tipo salvaje, o PI3Kα mutante. En líneas celulares de cáncer con mutación PIK3CA y deleción de PTEN, este compuesto reduce la fosforilación de AKT T308 y AKT S473 (IC(50) de 7,5-47 nM y 3,8-20 nM, respectivamente) e inhibe la proliferación celular (IC(50) de 179-313 nM). Inhibe la actividad de mTORC1 en células, medida mediante un ensayo estimulado por nutrientes independiente de PI3K, con una IC(50) de 32 nM e inhibe la activación de los efectores posteriores de PI3K y mTOR, incluidos AKT, FKHRL1, PRAS40, p70S6K, 4EBP1 y S6RP. La exposición a corto plazo a este químico inhibe predominantemente PI3K, mientras que la inhibición de mTOR persiste durante 24 a 48 horas. Este compuesto induce una detención del ciclo celular en G(1), concomitante con una regulación al alza de p27 Kip1 y una reducción de Rb. [1]

Se observa actividad antitumoral de PF-04691502 en xenoinjertos de U87 (PTEN nulo), SKOV3 (mutación PIK3CA) y carcinoma de pulmón no microcítico. [1] Este compuesto inhibe el crecimiento tumoral a los 7 días en un 72 %. La imagen por FDG-PET reveló que reduce drásticamente el metabolismo de la glucosa. Los biomarcadores tisulares de la actividad de la vía PI3K/mTOR, p-AKT (S473) y p-RPS6 (S240/244), también se inhiben drásticamente después de su tratamiento. [2]

• Ensayo de quinasa

  El ensayo de polarización de fluorescencia para la inhibición competitiva de ATP se realiza de la siguiente manera: la solución de dilución de mPI3Kα (90 nM) se prepara en tampón de ensayo fresco (50 mM Hepes pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,05 % CHAPS) y se mantiene en hielo. La reacción enzimática contiene 0,5 nM de PI3Kα de ratón (complejo p110α/p85α purificado de células de insecto), 30 μM de PIP2, PF-04691502 (0, 1, 4 y 8 nM), 5 mM de MgCl₂ y diluciones seriadas de ATP de 2 veces (0–800 μM). El dimetilsulfóxido final es del 2,5 %. La reacción se inicia mediante la adición de ATP y se termina después de 30 minutos con 10 mM de EDTA. En una placa de detección, 15 µL de mezcla de detector/sonda que contiene 480 nM de dominio GST-Grp1PH y 12 nM de PIP3 fluorescente marcado con TAMRA en tampón de ensayo se mezclan con 15 µL de mezcla de reacción de quinasa. La placa se agita durante 3 minutos y se incuba durante 35 a 40 minutos antes de la lectura en un LJL Analyst HT.

• Líneas celulares

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells

• Concentraciones

  0-3 mM

• Tiempo de incubación

  3 days

• Método

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells are plated at 3,000 cell/well in 96-well culture plates in growth medium with 10% FBS. Cells are incubated overnight and treated with DMSO (0.1% final) or serial diluted this compound for 3 days. Resazurin is added to 0.1 mg/mL. Plates are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 3 hours. Fluorescence signals are read as emission at 590 nm after excitation at 530 nm. IC50 values are calculated by plotting fluorescence intensity to drug concentration in nonlinear curve

• Modelos animales

  LSL-Kras^G12D heterozygous mice (B6.129-Kras ^tm4Tyj) and Pten^del mice (c;129S4-Pten ^tm1Hwu/J), Orthotopic transplant of ovarian tumors

• Dosificaciones

  daily at either 7.5 or 10 mg/kg

• Administración

  Administered via oral gavage