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Descripción biológica
| Especificidad | Perforin Antibody [P20D17] reconoce los niveles endógenos de la proteína Perforin total. |
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| Antecedentes | La perforina es una glicoproteína formadora de poros producida principalmente por linfocitos citotóxicos como las células asesinas naturales (NK) y los linfocitos T citotóxicos (CTL). Pertenece a la familia MACPF (complejo de ataque de membrana/perforina) y consta de dominios críticos para su función: el dominio MACPF responsable de la formación de poros, un dominio C2 dependiente del calcio que media la unión a la membrana y un dominio similar a EGF que proporciona flexibilidad estructural. Una vez secretada en la sinapsis inmunológica formada entre la célula citotóxica y la célula diana (infectada por virus o maligna), la perforina se oligomeriza y se inserta en la membrana de la célula diana, formando poros transmembrana de aproximadamente 20 nm de diámetro. Estos poros permiten la entrada de granzimas pro-apoptóticas en el citosol, lo que desencadena la apoptosis de la célula diana. Residuos clave como R298 son importantes para la oligomerización y la formación de poros. La formación de poros mediada por perforina es esencial para la vigilancia inmunitaria y la eliminación de células anormales, y las deficiencias o mutaciones en la perforina causan trastornos graves de inmunodeficiencia como la linfohistiocitosis hemofagocítica familiar (FHL). La perforina también desempeña un papel en la regulación inmunitaria y está implicada cuando la función citotóxica se altera o desregula en diversas enfermedades. |
Información de uso
| Aplicación | IHC | Dilución |
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|---|---|---|---|---|---|
| Reactividad | Human | ||||
| Fuente | Mouse Monoclonal Antibody | MW | 70 kDa | ||
| Tampón de almacenamiento | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Almacenamiento (Desde la fecha de recepción) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Referencias
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Datos de aplicación
IHC
Validado por Selleck
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Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F2444 at 1:100 dilution.