PCI-34051

PCI-34051 posee una potencia prometedora para HDAC8 con un K_i de 10 nM. Este compuesto tiene una alta selectividad (aproximadamente cinco veces) para HDAC8 en relación con otras HDACs de clase I, incluida HDAC1. Revela una selectividad superior a 200 veces sobre HDAC1 y HDAC6, y superior a 1000 veces sobre HDAC2, HDAC3 y HDAC10. Este químico inhibe la línea tumoral ovárica OVCAR-3 con un GI50 de 6 μM y 15% de muerte celular. No se observa acetilación significativa de tubulina ni de histonas en las líneas celulares sensibles tratadas con este compuesto a concentraciones inferiores a 25 μM a las 24 horas ni en puntos temporales anteriores. Induce un efecto citotóxico selectivo solo en líneas celulares derivadas de neoplasias malignas de células T. Este compuesto induce apoptosis dependiente de caspasas. Cuando se mide la actividad de la caspasa-3 en varios momentos después del tratamiento con 5 μM de este químico, se observan niveles crecientes de actividad de 12 a 24 a 48 horas, otra característica de la apoptosis, consistente con los niveles más altos de actividad de la caspasa en este punto temporal. No estimula la escisión de Bid, un efecto característico de la vía apoptótica extrínseca. Mientras que P116 y J.RT3-T.5 son sensibles a este compuesto, la línea J.gamma1 deficiente en PLCγ1 revela una marcada disminución en la extensión de su apoptosis inducida. Además, los niveles de calcio en estado estacionario influyen fuertemente en la apoptosis inducida por este químico. Induce la liberación de citocromo c de las mitocondrias.[1]

PCI-34051 es un potente y específico inhibidor de HDAC8.

• Actividad de histona desacetilasa

  Para la caracterización de PCI-34051, las mediciones se realizan en un volumen de reacción de 100 μL utilizando placas de ensayo de 96 pocillos en un lector de placas de fluorescencia. Para cada isoenzima. La proteína HDAC en tampón de reacción (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001% Tween-20, 5% dimetil sulfóxido, pH 7,4, suplementado con albúmina sérica bovina en concentraciones de 0-0,05%) se mezcla con este compuesto a varias concentraciones y se deja incubar durante 15 min. Se añade tripsina a una concentración final de 50 nM, y acetil-glicil-Ala-(N-acetil-Lis)-amino-4-metilcoumarina se añade a una concentración final de 25-100 μM para iniciar la reacción. Después de un tiempo de latencia de 30 min, la fluorescencia se mide durante un período de 30 min utilizando una longitud de onda de excitación de 335 nm y una longitud de onda de detección de 460 nm. El aumento de la fluorescencia con el tiempo se utiliza como medida de la velocidad de reacción.

• Líneas celulares

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Concentraciones

  5 μM

• Tiempo de incubación

  24 hours

• Método

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Modelos animales

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Dosificaciones

  40 mg/kg

• Administración

  i.p.