AZD2281 (Olaparib)

Olaparib (AZD2281) actuaría contra las mutaciones BRCA1 o BRCA2 y no es sensible a la tankyrase-1 (IC50 >1 μM). Podría anular la actividad PARP-1 a concentraciones de 30-100 nM en células SW620. Este compuesto es hipersensible a las líneas celulares deficientes en BRCA1 (MDA-MB-463 y HCC1937), en comparación con las líneas celulares competentes en BRCA1 y BRCA2 (Hs578T, MDA-MB-231 y T47D). [1] Es fuertemente sensible a las células KB2P debido a la supresión de la reparación por escisión de bases por la inhibición de PARP, lo que puede resultar en la conversión de roturas de cadena sencilla a roturas de doble cadena durante la replicación del ADN, activando así las vías de recombinación dependientes de BRCA2. [2]

Olaparib (AZD2281) (10 mg/kg, p.o.) en combinación suprime significativamente el crecimiento tumoral en xenoinjertos SW620. [1] Muestra una gran respuesta a los tumores mamarios Brca1^-/-;p53^-/- (50 mg/kg i.p. por día), mientras que no hay respuestas a los tumores mamarios Ecad^-/-;p53^-/- deficientes en HR. Este compuesto incluso no muestra toxicidad limitante de la dosis en ratones con tumores. [3] Se ha utilizado para tratar tumores con mutaciones BRCA, como los cánceres de ovario, mama y próstata. Además, muestra una inhibición selectiva de las células tumorales deficientes en ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated), lo que indica que podría ser un agente potencial para el tratamiento de tumores linfoides mutantes de ATM. [4]

• Ensayo FlashPlate (ensayo de cribado de 96 pocillos)

  En las columnas 1 a 10, se añade 1 μL de Olaparib (AZD2281) (en DMSO), y solo se añade 1 μL de DMSO a los pocillos de control positivo (POS) y negativo (NEG) (columnas 11 y 12, respectivamente) de una FlashPlate pretratada. PARP-1 se diluye 1:40 en tampón (tampón B: 10% de glicerol (v/v), 25 mM de HEPES, 12,5 mM de MgCl₂, 50 mM de KCl, 1 mM de DTT, 0,01% de NP-40 (v/v), pH 7,6) y se añaden 40 μL a los 96 pocillos (la concentración final de PARP-1 en el ensayo es de ~1 ng/μL). La placa se sella y se agita a temperatura ambiente durante 15 min. Después de esto, se añaden 10 μL de mezcla de reacción positiva (0,2 ng/μL de ADN de oligonucleótido de doble cadena [M3/M4] por pocillo, 5 μM de concentración final de NAD⁺ en el ensayo, y 0,075 μCi de ³H-NAD⁺ por pocillo) a los pocillos apropiados (columnas 1-11). La mezcla de reacción negativa, que carece del oligonucleótido de ADN, se añade a la columna 12 (utilizándose el valor medio del control negativo como fondo). La placa se vuelve a sellar y se agita durante otros 60 min a temperatura ambiente para permitir que la reacción continúe. Luego, se añaden 50 μL de ácido acético helado (30%) a cada pocillo para detener la reacción, y la placa se sella y se agita durante otros 60 min a temperatura ambiente. La señal tritiada unida a la FlashPlate se determina luego en recuentos por minuto (CPM) utilizando el lector de placas TopCount.

• Líneas celulares

  Breast cancer cell lines including SW620 colon, A2780 ovarian, HCC1937, Hs578T, MDA-MB-231, MDA-MB-436, and T47D

• Concentraciones

  1-300 nM

• Tiempo de incubación

  7-14 days

• Método

  The cytotoxicity of Olaparib (AZD2281) is measured by clonogenic assay. It is dissolved in DMSO and diluted by culture media before use. The cells are seeded in six well plates and left to attach overnight. Then this compound is added at various concentrations and the cells are incubated for 7-14 days. After that the surviving colonies are counted for calculating the IC50.

• Modelos animales

  Brca1^-/-;p53^-/- mammary tumors are generated in K14cre;Brca1^F/F;p53^F/F mice.

• Dosificaciones

  50 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p. injection at 10 μL/g of body weight