NSC 23766 Trihydrochloride

NSC23766 se identifica para encajar en una hendidura de la superficie de Rac1, conocida por ser crítica para la especificación de GEF. NSC23766 inhibe eficazmente la unión y activación de Rac1 por los GEF específicos de Rac Trio o Tiam1 de manera dosis-dependiente sin interferir con la unión o activación de Cdc42 o RhoA estrechamente relacionadas por sus respectivos GEF o con la interacción de Rac1 con BcrGAP o el efector PAK1. [1]

NSC 23766 es activo en la regulación de las funciones de Rac GTPasa en el citoesqueleto y en muchas funciones celulares, incluyendo el Cell Cycle, el crecimiento celular, la adhesión, la migración y la transcripción génica. NSC 23766 (50 μM) bloquea potentemente la activación de Rac1 inducida por el suero o el factor de crecimiento derivado de plaquetas y la formación de lamelipodios sin afectar la actividad de Cdc42 o RhoA endógenas en células NIH 3T3. NSC 23766 reduce el crecimiento de células NIH 3T3 estimulado por Trio o Tiam1, pero no por Vav, Lbc, Intersectin, o un mutante de Rac1 constitutivamente activo, y suprime la transformación celular inducida por Trio, Tiam1 o Ras. NSC23766 inhibe de forma dosis-dependiente la proliferación de células PC-3 y el crecimiento independiente del anclaje. 25 μM de NSC23766 inhiben la invasión de células PC-3 a través de Matrigel en un 85 %. [1] 50 μM de NSC 23766 inhiben la activación inducida por trombina de Rac1 y Rac2 en plaquetas humanas, así como la agregación plaquetaria. [2]

NSC23766 previene la producción de Aβ40 y Aβ42 en células swAPP-HEK293 sin afectar a Notch y sAPPα. NSC23766 previene la actividad de γ-secretasa en la célula, pero no actúa como un inhibidor directo de la γ-secretasa. NSC23766 reduce de forma dosis-dependiente los niveles de Aβ40 secretado e intracelular con una IC50 de 48,94 μM. 50 μM de NSC 23766 inhiben la liberación de Aβ42 en un 57,97 %. [3]

NSC23766 regula la expresión de la óxido nítrico sintasa endotelial y la función endotelial. 100 μM de NSC23766 reprimen la actividad del promotor de eNOS en un 60 % en ECs aórticas bovinas y en un 30 % a 35 % en células bEND.3. La inhibición de Rac1 con NSC23766 desestabiliza el ARNm de eNOS y acorta su vida media a 17 horas. NSC23766 atenúa de forma dosis-dependiente la relajación inducida por ACh de los anillos aórticos de ratones de tipo salvaje. [4]

NSC23766 inhibe el crecimiento celular e induce la apoptosis. NSC23766 disminuye la viabilidad de las células MDA-MB-468 y MDA-MB-231 de manera dosis-dependiente con una IC50 de ~10 μM, lo que no se correlaciona con el estado del receptor de estrógenos (ER), el receptor de progesterona (PR), Her2 y la mutación p53. NSC23766 tiene poco efecto sobre la supervivencia de las células epiteliales mamarias normales MCF12A. Después de 24 horas de exposición a NSC 23766, las células MDA-MB-231 mostraron un aumento del 41 % al 65 % en la fase G1 y una disminución concomitante en las fases S y G2-M. 100 μM de NSC23766 inducen un aumento de seis veces de las MDA-MB-468 apoptóticas. La inhibición de NSC23766 sobre la detención del Cell Cycle o la apoptosis en células de cáncer de mama está mediada por la regulación a la baja de la ciclina D1, la survivina y el inhibidor de la apoptosis ligado al cromosoma X. [5]

NSC23766 induce la movilización de células madre/progenitoras hematopoyéticas. La administración intraperitoneal de NSC23766 (2,5 mg/kg) en la cepa de ratón C57Bl/6 «de baja movilización» conduce a un aumento de dos veces en las células madre/progenitoras hematopoyéticas circulantes 6 horas después de la inyección. [2]

NSC23766 alivia la lesión pulmonar aguda inducida por lipopolisacáridos en ratones. El tratamiento con NSC23766 a 1 o 3 mg/kg no solo reduce la infiltración de células inflamatorias y las actividades de MPO, sino que también inhibe la expresión de ARNm de los mediadores proinflamatorios, el factor de necrosis tumoral-α y la interleucina-1β. NSC23766 también reduce la acumulación de azul de Evans y albúmina en los pulmones desafiados con LPS. [6]

• Ensayo de actividad de Rho GTPasa

  Las células se cultivan en fase logarítmica en una placa de 10 cm, y se las somete a privación en medio con 0.5% de suero o según se indique lo contrario durante 24 h antes de la lisis en un tampón que contiene 20 mM Tris HCl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1% Nonidet P-40, 10% glicerol y una mezcla de inhibidores de proteasa 1×. Los lisados se clarifican, las concentraciones de proteínas se normalizan y el Rac1 unido a GTP en los lisados se mide mediante un ensayo de pull-down de dominio efector. Para el ensayo de pull-down de His6-PAK1 PBD, los lisados celulares se incuban con el dominio His6-PAK1 PBD inmovilizado en agarosa-Ni2+ (~1 μg cada uno) purificado de E. coli durante 30 min. Los coprecipitados de agarosa-Ni2+ se lavan dos veces en el tampón de lavado y se analizan mediante inmunotransferencia con un anticuerpo monoclonal anti-Rac1.

• Líneas celulares

  Human breast cancer cells MDA-MB-468

• Concentraciones

  0-100 μM

• Tiempo de incubación

  2 days

• Método

  Cells (1.5 × 10⁴/mL) are seeded in each well of 96-well tissue culture plates with 200 μL of medium. After 24 hours of plating, the medium is replaced with 200 μL of fresh medium containing NSC23766 at the indicated concentrations. At the end of the treatment period 20 μL of MTS solution are added to each well and incubated at 37 ℃ for 2 hours. Absorbance at 490 nm is read on a 96-well plate reader.

• Modelos animales

  Male ICR mic

• Dosificaciones

  1 or 3 mg/kg

• Administración

  i.p.