Nirogacestat (PF-03084014)

N.º de catálogoS8018 Lote:S801804

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Datos técnicos

Fórmula

C27H41F2N5O
Peso molecular 489.64 Número CAS 1290543-63-3
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.14 mM)
Ethanol 98 mg/mL (200.14 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014) es un inhibidor selectivo de la gamma-secretase con una IC50 de 6,2 nM en un ensayo sin células, e induce la apoptosis. Fase 2.
Objetivos
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
In vitro Nirogacestat (PF-03084014) inhibe la escisión del receptor Notch en ensayos celulares utilizando células HPB-ALL que albergan mutaciones tanto en los dominios de heterodimerización como PEST en Notch1 con una IC50 de 13,3 nM. Regula a la baja la expresión de los genes diana de Notch Hes-1 y cMyc en células HPB-ALL con una IC50 de <1 nM y 10 nM, respectivamente, e inhibe el crecimiento celular de un subconjunto de líneas celulares humanas de T-ALL (HPB-ALL, DND-41, TALL-1 y Sup-T1) mediante la inducción de la detención del ciclo celular y la apoptosis con IC50s de 30-100 nM. Este compuesto reduce la proliferación de HUVEC con una IC50 de 0,5 μM, y disminuye la formación de la luz con un valor de IC50 de 50 nM. A 1 μM no tiene efecto antiproliferativo en células MX1; sin embargo, inhibe la migración en un 95%.
In vivo Nirogacestat (PF-03084014) administrado oralmente en una dosis única de 200 mg/kg causa una inhibición máxima de NICD de ~80% en tumores de xenoinjerto HPB-ALL. Muestra una robusta actividad antitumoral en este modo con una inhibición máxima del crecimiento tumoral de ~92% a una dosis de 150 mg/kg, acompañada de una reducción significativa de la tinción de NICD/Notch1, el índice mitótico tumoral (Ki67) y la apoptosis (caspasa-3 activada). A 120 mg/kg, este compuesto induce apoptosis, antiproliferación, reduce la capacidad de autorrenovación de las células tumorales, deteriora la vasculatura tumoral y disminuye la actividad metastásica en ratones con tumores de cáncer de mama HCC1599. Su tratamiento muestra una actividad antitumoral significativa en varios tipos de modelos de xenoinjertos de mama con un valor de TGI de al menos 50%.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[3]
  • ensayo de γ-secretase

    Un fragmento de ADN que codifica los aminoácidos 596 - 695 de la isoforma de 695 aa de APP (APP695) y la secuencia Flag (DYKDDDDK) en el extremo C-terminal se genera por amplificación PCR con oligonucleótidos diseñados adecuadamente y el cDNA de APP695. La Met que sirve como sitio de inicio de la traducción es el residuo 596 de APP695 (el residuo P1 con respecto al sitio de escisión de la β-secretase). Este fragmento de ADN se inserta en el vector de expresión procariota pET2-21b. La proteína recombinante, C100Flag, se sobreproduce en Escherichia coli [cepa BL21(DE3)] y se purifica mediante cromatografía en columna Mono-Q. C100Flag (1,7 μM) se incuba con membranas celulares (0,5 mg/mL) en presencia de CHAPSO, CHAPS (3-[(3-colamidopropil)dimetilammonio]-1-propanosulfonato), o Triton X-100 (0, 0,125, 0,25, 0,5 o 1%) en tampón B (50 mM Pipes, pH 7,0; 5 mM MgCl2; 5 mM CaCl2; 150 mM KCl) a 37°C. Las reacciones se detienen añadiendo RIPA (150 mM NaCl/1,0% NP-40/0,5% desoxicolato de sodio; 0,1% SDS/50 mM Tris HCl, pH 8,0) y hirviendo durante 5 min. Las muestras se centrifugan y las soluciones del sobrenadante se analizan para los péptidos Aβ mediante ECL. Los productos relacionados con Aβ40 y Aβ42 de la procesamiento mediado por γ-secretase de C100Flag poseen una Met en el N-terminal y, por lo tanto, se definen como M-Aβ40 y M-Aβ42, respectivamente. Del mismo modo, la solución de sobrenadante (0,125 mg/mL) de membranas de células HeLa extraídas con CHAPSO (γ-secretase solubilizada) se incuba con C100Flag (1,7 μM) en tampón B que contiene 0,25% de CHAPSO y posteriormente se analiza para M-Aβ40 y M-Aβ42 utilizando ECL. Este compuesto, Nirogacestat (PF-03084014), se utiliza en el contexto experimental.
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • Concentraciones

    ~1 μM

  • Tiempo de incubación

    7 days

  • Método

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
Estudio en animales:[1]
  • Modelos animales

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • Dosificaciones

    150 mg/kg

  • Administración

    p.o. twice daily

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Validación de productos por parte del cliente

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

Datos de [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

Datos de [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

Sellecks Nirogacestat (PF-03084014) Ha sido citado por 21 Publicaciones

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

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