MK-2206 Dihydrochloride

El MK-2206 2HCl es un inhibidor alostérico y se activa por el dominio de homología de pleckstrina. Este compuesto inhibe la autofosforilación de Akt T308 y S473. También previene la fosforilación mediada por Akt de moléculas de señalización aguas abajo, incluyendo TSC2, PRAS40 y proteínas ribosomales S6. [1] Este químico inhibe las líneas celulares Ras de tipo salvaje (WT) (A431, HCC827 y NCI-H292) más potentemente en comparación con las líneas celulares mutantes Ras (NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299 y Calu-6). También muestra respuestas sinérgicas en combinación con agentes citotóxicos en células tumorales pulmonares NCI-H460 u ováricas A2780. [2] La inhibición de Akt mediada por MK-2206 o siRNA activa fuertemente la autophagy en células de glioma humano. Sin embargo, el silenciamiento del factor de elongación eucariótico-2 (eEF-2) suprime la autophagy inducida por este compuesto, con una promoción de la muerte celular apoptótica. [3]

El MK-2206 2HCl muestra un 60% de TGI e inhibe más del 70% de phospho-Akt1/2 (T308 y S473) en xenoinjertos de cáncer de ovario A2780 a una dosis de 240 mg/kg. [1] Este compuesto exhibe una actividad antitumoral significativa en xenoinjertos NCI-H292 en combinación. [2]

• ensayo de quinasas Akt

  Las quinasas Akt se ensayan mediante un sustrato peptídico biotinilado derivado de GSK. La extensión de la fosforilación del péptido se determina mediante Fluorescencia de Tiempo Resuelto Homogénea (HTRF) utilizando un anticuerpo monoclonal acoplado a un quelato de lantánido (Lance) específico para el fosfopéptido en combinación con un fluoróforo de aloficocianina unido a estreptavidina (SA-APC) que se unirá a la porción de biotina del péptido. Cuando Lance y APC están cerca, se produce una transferencia de energía no radiativa de Lance a APC, seguida de la emisión de luz de APC a 655 nm. Tampón de ensayo 10X: 500 mM HEPES, pH 7,5, 1% PEG, 16,6 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% BSA, 20 mM 9-glicerol fosfato; Tampón de inactivación: 50 mM HEPES pH 7,3, 16,6 mM EDTA, 0,1% BSA, 0,1% Triton X-100, 0,17 nM de anticuerpo monoclonal marcado, 0,0067 mg/mL SA-APC; Solución de trabajo de ATP/MgCl₂: tampón de ensayo 1X, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% glicerol, Akt activo; Solución de trabajo de péptido: tampón de ensayo 1X, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% glicerol, 2 TM de péptido biotinilado GSK. La reacción se ensambla añadiendo 16 µL de solución de trabajo de ATP/MgCl₂ a los pocillos apropiados. Se añade MK-2206 2HCl o vehículo (1,0 µL), seguido de 10 µL de solución de trabajo de péptido. La reacción se inicia añadiendo 13 μL de la solución de trabajo enzimática y mezclando. Se deja que la reacción prosiga durante 50 min y luego se detiene con la adición de 60 µL de tampón de inactivación HTRF. Las reacciones detenidas se incuban a temperatura ambiente durante al menos 30 min y luego se leen en el instrumento.

• Líneas celulares

  A431, HCC827, NCI-H292, NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, Calu-6 and NCI-H460 cells

• Concentraciones

  0, 0.3, 1 and 3 μM

• Tiempo de incubación

  72 or 96 hours

• Método

  MK-2206 2HCl is dissolved in DMSO as a stock solution and diluted by culture media before use. Cells are seeded at a density of 2-3 × 10³ in 96-well plates and incubated for 24 hours. Then this compound (0, 0.3, 1 and 3 μM) is added to the cells. Cell proliferation is determined after 72 or 96 hours.

• Modelos animales

  SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3, and NCI-H460 models in male CD1-nude mice

• Dosificaciones

  120 mg/kg

• Administración

  Orally administered