MG132

MG-132 muestra una actividad >1000 veces mayor que ZLLal en la inhibición de la actividad degradante de ZLLL-MCA del proteasome 20S con una IC50 de 100 nM frente a 110 μM. Este compuesto también inhibe la calpaína con una IC50 de 1,2 μM. Este químico induce el crecimiento de neuritas en células PC12 a una concentración óptima de 20 nM, mostrando una potencia 500 veces mayor que ZLLal. [1] Este compuesto (10 μM) inhibe potentemente la activación de NF-κB inducida por TNF-α, la transcripción del gen de interleucina-8 (IL-8) y la liberación de la proteína IL-8 en células A549 mediante la inhibición de la degradación de IκBα mediada por el proteasome. [2] Este tratamiento químico induce potentemente la apoptosis dependiente de p53 en células KIM-2 mediante la inhibición del proteasome 26S. [3] A diferencia de BzLLLCOCHO o PS-341, el tratamiento con este compuesto resulta en una débil inhibición de las actividades quimotripsina-like (CT-L) y peptidilglutamil peptid hidrolizante (PGPH) del proteasome 26S, mientras que las células de mieloma múltiple (U266 y OPM-2) son más sensibles a la inducción de apoptosis por este químico que BzLLLCOCHO. [4] Este compuesto (1 μM) sensibiliza las células de cáncer de próstata resistentes a TRAIL activando los miembros de la familia AP-1 c-Fos y c-Jun, que, a su vez, reprimen la molécula antiapoptótica c-FLIP(L). [5] Este químico mejora significativamente la capacidad del hexafosfato de inositol (IP6) para reducir la actividad metabólica celular en ambas líneas celulares de cáncer de próstata androgeno-independiente (AIPCa) PC3 y DU145. [6]

La administración de MG-132 rescata eficazmente los niveles de expresión y la localización en la membrana plasmática de la distrofina, β-distroglicano, α-bdistroglicano y α-sarcoglicano en las fibras musculares esqueléticas de ratones mdx, reduce el daño de la membrana muscular y mejora los signos histopatológicos de la distrofia muscular. [7] El tratamiento con este compuesto reduce significativamente la atrofia del músculo esquelético inducida por la inmovilización en ratones, mediante la regulación a la baja de las ubiquitina ligasas específicas del músculo atrogin-1/MAFbx y el ARNm de MuRF-1. [8]

• Medición de las actividades inhibitorias de MG-132 contra el proteasome 20S

  La mezcla de reacción para el ensayo de inhibición del proteasome 20S contiene 0,1 M Tris-acetato, pH 7,0, proteasome 20S, MG-132 y 25 μM de sustrato disuelto en dimetilsulfóxido en un volumen final de 1 mL. Después de la incubación a 37 °C durante 15 minutos, la reacción se detiene mediante la adición de 0,1 mL de SDS al 10% y 0,9 mL de Tris acetato 0,1 M, pH 9,0. Se mide la fluorescencia de los productos de reacción. Para determinar la IC50 contra el proteasome 20S, se incluyen varias concentraciones de este compuesto en la mezcla de ensayo.

• Líneas celulares

  KIM-2, HC11, and ES

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Tiempo de incubación

  24 and 48 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of MG-132 for 24, and 48 hours. Supernatant and monolayer cells are harvested by centrifugation and fixed in 70% ethanol in PBS for staining with acridine orange. Equal volumes of cells and acridine orange (5 mg/mL in PBS) are mixed on a microscope slide and examined by fluorescence microscopy. For annexin V analysis, cells are harvested by centrifugation and stained with annexin V and propidium iodide. For cell cycle analysis, cells are rehydrated in PBS at room temperature for 10 minutes, followed by staining with propidium iodide (5 mg/mL). All samples are analyzed using a Coulter Epics XL flow cytometer.

• Modelos animales

  Male mdx (C57BL/10ScSn DMD mdx) mice

• Dosificaciones

  ~10 μg/kg/day

• Administración

  Injection