Hoja de datos

Descripción biológica

Especificidad	Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa Antibody [G24P23] detecta niveles endógenos de la proteína total Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa.
Antecedentes	Las proteínas Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa (MAGE) son antígenos asociados a tumores, típicamente restringidos a las células germinales del testículo en tejidos adultos normales, pero expresados de manera aberrante en varios cánceres, incluyendo melanoma, glioma, pulmón, vejiga y mieloma múltiple. La designación “100+/7 kDa” se refiere a variantes o isoformas con pesos moleculares alrededor de 100 kDa y 7 kDa. Estructuralmente, las proteínas MAGE comparten un dominio de homología MAGE (MHD) conservado de ~200 aminoácidos, compuesto por dos dominios de hélice alada que forman una hendidura profunda para la unión de péptidos o proteínas, flanqueados por regiones N- y C-terminales variables. Funcionalmente, las proteínas MAGE pueden actuar como motores oncogénicos interactuando con RING-type E3 ubiquitin ligases, modulando las vías de degradación de proteínas que regulan la apoptosis, la proliferación y el metabolismo; por ejemplo, MAGE-A3 promueve la supervivencia tumoral estimulando la degradación de p53 mediada por TRIM28, mientras que MAGE-A4 puede inducir la apoptosis a través de diferentes proteínas asociadas. Su expresión específica en tumores, plasticidad estructural y roles oncogénicos hacen de las MAGE tanto biomarcadores como posibles dianas terapéuticas en la inmunoterapia del cáncer.

Especificidad

Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa Antibody [G24P23] detecta niveles endógenos de la proteína total Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa.

Antecedentes

Las proteínas Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa (MAGE) son antígenos asociados a tumores, típicamente restringidos a las células germinales del testículo en tejidos adultos normales, pero expresados de manera aberrante en varios cánceres, incluyendo melanoma, glioma, pulmón, vejiga y mieloma múltiple. La designación “100+/7 kDa” se refiere a variantes o isoformas con pesos moleculares alrededor de 100 kDa y 7 kDa. Estructuralmente, las proteínas MAGE comparten un dominio de homología MAGE (MHD) conservado de ~200 aminoácidos, compuesto por dos dominios de hélice alada que forman una hendidura profunda para la unión de péptidos o proteínas, flanqueados por regiones N- y C-terminales variables. Funcionalmente, las proteínas MAGE pueden actuar como motores oncogénicos interactuando con RING-type E3 ubiquitin ligases, modulando las vías de degradación de proteínas que regulan la apoptosis, la proliferación y el metabolismo; por ejemplo, MAGE-A3 promueve la supervivencia tumoral estimulando la degradación de p53 mediada por TRIM28, mientras que MAGE-A4 puede inducir la apoptosis a través de diferentes proteínas asociadas. Su expresión específica en tumores, plasticidad estructural y roles oncogénicos hacen de las MAGE tanto biomarcadores como posibles dianas terapéuticas en la inmunoterapia del cáncer.

Información de uso

Aplicación

IHC, FCM

Dilución

IHC

1:5 - 1:20

Reactividad

Human

Fuente

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampón de almacenamiento

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Almacenamiento
(Desde la fecha de recepción)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Métodos experimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Métodos experimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26910052/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23946777/

Datos de aplicación

IHC

Validado por Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human melanoma tissue with F3175 at 1:20 dilution.