Maraviroc (UK-427857)

Maraviroc inhibe la unión de γ-S-GTP estimulada por MIP-1β a las membranas de las células HEK-293, lo que indica su capacidad para inhibir la estimulación dependiente de quimiocinas del intercambio de GDP-GTP en el complejo CCR5/proteína G. Este compuesto también inhibe el evento posterior de la redistribución de calcio intracelular inducida por quimiocinas, con valores de IC50 que oscilan entre 7 y 30 nM obtenidos contra MIP-1β, MIP-1α y RANTES. En los mismos experimentos, no desencadena la liberación de calcio intracelular a concentraciones de hasta 10 μM, lo que indica que carece de actividad agonista de CCR5. De acuerdo con esto, este químico no induce la internalización de CCR5. Es activo a bajas concentraciones nanomolares contra HIV-1 Ba-L. Este compuesto inhibe los 200 virus pseudotipados con una IC90 media geométrica de 13,7 nM. [1] A concentraciones >1000 veces la concentración inhibitoria del 50%, no inhibió otros receptores de quimiocinas (CCR1, 2, 3, 4, 7 y 8; CXCR1 y 2) en un grado clínicamente relevante[3].

Los valores de semivida de Maraviroc son de 0,9 horas en la rata y de 2,3 horas en el perro. Tras la administración oral (2 mg/kg) al perro, la Cmax (256 ng/ml) se produjo 1,5 horas después de la dosis y la biodisponibilidad es del 40%. Para la rata, aproximadamente el 30% de la dosis administrada se absorbe del tracto intestinal. [1] Se desafía vaginalmente a ratonas RAG-hu con HIV-1 una hora después de la aplicación intravaginal del gel del compuesto. Estas ratonas tratadas con gel están totalmente protegidas contra el desafío vaginal con HIV-1, en contraste con las ratonas tratadas con gel de placebo, que se infectaron todas. La administración vaginal de este compuesto protege completamente a los ratones contra el desafío vaginal con HIV-1. Si bien existe un patrón claro de disminución de las células T CD4 en ratones tratados con gel de placebo y desafiados viralmente, sus niveles son estables en ratones que reciben este gel químico. [2]

• Inhibición de la unión de quimiocinas a CCR5

  La unión de MIP-1α, MIP-1β y RANTES marcados con ¹²⁵I a CCR5 se mide utilizando células HEK-293 intactas que expresan de forma estable el receptor o preparaciones de membrana de las mismas. Brevemente, las células se resuspenden en tampón de unión (50 mM HEPES que contiene 1 mM de CaCl₂, 5 mM de MgCl₂ y 0,5% de albúmina sérica bovina [BSA] y ajustado a pH 7,4) a una densidad de 2 × 10⁶ células/ml. Para las preparaciones de membrana, las células lavadas con solución salina tamponada con fosfato (PBS) se resuspenden en tampón de lisis (20 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 1 tableta COMPLETE por cada 50 mL, pH 7,4) antes de la homogeneización en un homogeneizador de mano Polytron, ultracentrifugación (40.000× g durante 30 min), y resuspensión en tampón de unión a una concentración de proteína de 0,25 mg/mL (12,5 μg de proteína de membrana se utiliza en cada pozo de una placa de 96 pocillos). MIP-1α, MIP-1β y RANTES radiomarcados con ¹²⁵I se preparan y diluyen en tampón de unión a una concentración final de 400 pM en el ensayo. Las diluciones de este compuesto se añaden a cada pozo a un volumen final de 100 μL, las placas de ensayo se incuban durante 1 hora y los contenidos se filtran a través de placas Unifilter prebloqueadas y lavadas que se cuentan después de secarse durante la noche.

• Líneas celulares

  PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells

• Concentraciones

  0-1 μM

• Tiempo de incubación

  5 days or 7 days

• Método

  Drug susceptibility assays are performed in 24-well tissue culture plates. Duplicate eight-point dilution series of Maraviroc are prepared in DMSO and medium to yield a final DMSO concentration of 0.1% (vol/vol) in the assay. PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells are infected with virus for 1 hour at 37 °C. Cells are subsequently washed once, and 3.6 × 10⁵ PBMC or 2.0 × 10⁵ PM-1 cells are added to each well of assay plates containing diluted this compound. Plates are incubated for 5 days (lab-adapted strains) or 7 days (primary isolates) at 37 °C in a humidified 5% CO₂ (vol/vol) atmosphere.

• Modelos animales

  Humanized BALB/c-Rag2−/−γc−/− and BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu) mice

• Dosificaciones

  ~64 μg

• Administración

  A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.