E7080 (Lenvatinib)

E7080, como potente inhibidor de la angiogénesis in vitro, muestra un efecto inhibidor significativo sobre la señalización de VEGF/KDR y SCF/Kit. Según los ensayos in vitro de tirosina quinasa y serina/treonina quinasa de receptores, este compuesto inhibe Flt-1, KDR, Flt-4 con una IC50 de 22, 4,0 y 5,2 nM, respectivamente. Además de estas quinasas, este compuesto también inhibe las Protein Tyrosine Kinase FGFR1 y PDGFR con valores de IC50 de 46, 51 y 100 nM para FGFR1, PDGFRα y PDGFRβ, respectivamente. [1] Este compuesto inhibe potentemente la fosforilación de VEGFR2 (IC50, 0,83 nM) y VEGFR3 (IC50, 0,36 nM) en HUVEC, que es estimulada por VEGF y VEGF-C, respectivamente. [2] Un estudio reciente muestra que el tratamiento con este compuesto (tanto a 1 μM como a 10 μM) resulta en una inhibición significativa de la migración e invasión celular al inhibir la señalización de FGFR y PDGFR. [3]

Cuando se administra por vía oral en un modelo de xenoinjerto H146, Lenvatinib (E7080) inhibe el crecimiento del tumor H146 a 30 y 100 mg/kg de manera dosis-dependiente y conduce a la regresión tumoral a 100 mg/kg. Además, este compuesto a 100 mg/kg disminuye la densidad de microvasos más que el tratamiento con anticuerpos anti-VEGF e imatinib. [1] Inhibe significativamente el crecimiento tumoral local en un modelo de almohadilla grasa mamaria (m.f.p.) MDA-MB-231 con RTV (volumen tumoral calculado el día 8/volumen tumoral el día 1) de 0,81, y reduce tanto la angiogénesis como la linfangiogénesis de los nódulos metastásicos establecidos del tumor MDA-MB-231 en los ganglios linfáticos. [2]

• Ensayo de cinasa in vitro [1]

  Los ensayos de Protein Tyrosine Kinase se realizan mediante HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) y ELISA (PDGFRβ), utilizando los dominios cinasa recombinantes de los receptores. En ambos ensayos, 4 μL de diluciones seriadas de este compuesto se mezclan en una placa redonda de 96 pocillos con 10 μL de enzima, 16 μL de solución de poli (GT) (250 ng) y 10 μL de solución de ATP (1 μM ATP) (la concentración final de DMSO es del 0,1%). En los pocillos para blancos, no se añade enzima. En los pocillos de control no se añade ningún artículo de prueba. La reacción de la cinasa se inicia añadiendo solución de ATP a cada pocillo. Después de 30 minutos de incubación a 30°C, la reacción se detiene añadiendo 0,5 M de EDTA (10 μL/pocillo) a la mezcla de reacción en cada pocillo. Se añade tampón de dilución adecuado para cada ensayo de cinasa a la mezcla de reacción. En el ensayo HTRF, 50 μL de la mezcla de reacción se transfieren a una placa EIA/RIA negra de 96 pocillos de 1/2 área, se añade solución HTRF (50 μL/pocillo) a la mezcla de reacción y, a continuación, la actividad de la cinasa se determina midiendo la fluorescencia con un detector de fluorescencia resuelto en el tiempo a una longitud de onda de excitación de 337 nm y longitudes de onda de emisión de 620 y 665 nm. En el ELISA, 50 μL de la mezcla de reacción se incuban en placas de poliestireno de 96 pocillos recubiertas de avidina a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de lavar con tampón de lavado, se añade solución de PY20-HRP (70 μL/pocillo) y la mezcla de reacción se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de lavar con tampón de lavado, se añade reactivo TMB (100 μL/pocillo) a cada pocillo. Después de varios minutos (10-30 minutos), se añade 1 M de H₃PO₄ (100 μL/pocillo) a cada pocillo. La actividad de la cinasa se determina midiendo la absorbancia a 450 nm con un lector de microplacas.

• Líneas celulares

  HUVECs

• Concentraciones

  0-10 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• Modelos animales

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• Dosificaciones

  ≤100 mg/kg

• Administración

  Administered via p.o.