LDN-57444

N.º de catálogoS7135 Lote:S713501

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Datos técnicos

Fórmula

C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃

Peso molecular

397.64

Número CAS

668467-91-2

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

11 mg/mL (27.66 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	6.000mg/ml (15.09mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 120 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.500mg/ml (1.26mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

LDN-57444 es un inhibidor de proteasoma reversible y competitivo para Uch-L1 con una IC50 de 0,88 μM, con una selectividad 28 veces mayor sobre la isoforma Uch-L3.

Objetivos

UCH-L1	UCH-L1	UCH-L3
0.4 μM(Ki)	0.88 μM	25 μM

In vitro

El tratamiento con 50 μM de LDN-57444 durante 24 h conduce a una inhibición del 70% de la actividad del proteasoma. Este compuesto causa una disminución significativa y dependiente de la concentración en la viabilidad celular a concentraciones superiores a 25 μM y la viabilidad celular se redujo al 61,81% a 50 μM. Es capaz de causar la muerte celular a través de la vía de la apoptosis al disminuir la actividad del sistema ubiquitina proteasoma y aumentar los niveles de proteínas altamente ubiquitinadas, ambos pueden activar la respuesta a proteínas mal plegadas. La apoptosis inducida por este químico puede ser desencadenada por la activación del estrés del retículo endoplasmático (ERS).

In vivo

LDN-57444 provoca alteraciones dramáticas en la distribución de proteínas sinápticas y la morfología de las espinas in vivo. El tratamiento con este compuesto también resulta en una caída rápida de la actividad de Uch-L1, pero la inhibición del proteasoma no tiene efecto sobre los niveles de cAMP durante un período de varias horas.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Cribado HTS Para iniciar un ensayo, se alicuan 0,5 μL de compuesto de prueba de 5 mg/mL (aproximadamente 50 μM de concentración de reacción final) o control de DMSO en cada pocillo. Tanto la enzima como el sustrato se preparan en tampón de reacción UCH (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT y 0,5 mg/mL de ovoalbúmina). Luego se añaden 25 μL de 0,6 nM de UCH-L1 a cada pocillo, excepto a los pocillos de control del sustrato, seguido de una agitación de la placa durante 45-60 s en un agitador automático. La mezcla enzima/compuesto se incuba a temperatura ambiente durante 30 min antes de añadir 25 μL de 200 nM de Ub-AMC para iniciar la reacción enzimática. La mezcla de reacción (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitina-AMC con 2,5 μg de compuesto de prueba) se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales antes de detener la reacción mediante la adición de 10 μL de ácido acético 500 mM por pocillo. La intensidad de emisión de fluorescencia se mide en un analizador LJL utilizando un conjunto de filtros de cumarina (ex = 365 nm, em = 450 nm) y se resta la fluorescencia intrínseca del compuesto para revelar la actividad enzimática. También se realizan un control de DMSO (0,5 μL de DMSO, 25 μL de UCH-L1, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético), un control enzimático (25 μL de UCH-L1, 25 μL de tampón, 10 μL de ácido acético), un control de sustrato (25 μL de tampón, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético) y un control de inhibidor (0,5 μL de ubiquitina aldehído [stock de 100 nM], 25 μL de UCH-L1, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético) en cada placa de ensayo para garantizar la calidad y la reproducibilidad. Se seleccionan los posibles inhibidores de UCH-L1 si los compuestos demostraron una inhibición superior al 60% en comparación con los controles. Las reacciones enzimáticas de UCH-L1 se repiten manualmente dos veces utilizando el mismo protocolo para confirmar los resultados de los compuestos activos del cribado primario asistido por robot.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares H1299 Concentraciones ~5 μM Tiempo de incubación 24 h Método MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Cribado HTS
Para iniciar un ensayo, se alicuan 0,5 μL de compuesto de prueba de 5 mg/mL (aproximadamente 50 μM de concentración de reacción final) o control de DMSO en cada pocillo. Tanto la enzima como el sustrato se preparan en tampón de reacción UCH (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT y 0,5 mg/mL de ovoalbúmina). Luego se añaden 25 μL de 0,6 nM de UCH-L1 a cada pocillo, excepto a los pocillos de control del sustrato, seguido de una agitación de la placa durante 45-60 s en un agitador automático. La mezcla enzima/compuesto se incuba a temperatura ambiente durante 30 min antes de añadir 25 μL de 200 nM de Ub-AMC para iniciar la reacción enzimática. La mezcla de reacción (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitina-AMC con 2,5 μg de compuesto de prueba) se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales antes de detener la reacción mediante la adición de 10 μL de ácido acético 500 mM por pocillo. La intensidad de emisión de fluorescencia se mide en un analizador LJL utilizando un conjunto de filtros de cumarina (ex = 365 nm, em = 450 nm) y se resta la fluorescencia intrínseca del compuesto para revelar la actividad enzimática. También se realizan un control de DMSO (0,5 μL de DMSO, 25 μL de UCH-L1, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético), un control enzimático (25 μL de UCH-L1, 25 μL de tampón, 10 μL de ácido acético), un control de sustrato (25 μL de tampón, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético) y un control de inhibidor (0,5 μL de ubiquitina aldehído [stock de 100 nM], 25 μL de UCH-L1, 25 μL de ubiquitina-AMC, 10 μL de ácido acético) en cada placa de ensayo para garantizar la calidad y la reproducibilidad. Se seleccionan los posibles inhibidores de UCH-L1 si los compuestos demostraron una inhibición superior al 60% en comparación con los controles. Las reacciones enzimáticas de UCH-L1 se repiten manualmente dos veces utilizando el mismo protocolo para confirmar los resultados de los compuestos activos del cribado primario asistido por robot.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
H1299
Concentraciones
~5 μM
Tiempo de incubación
24 h
Método
MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14522054/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22514658/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16923396/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18622688/

Expandir

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , J Cell Mol Med, 2017, 1-16 ]

Sellecks LDN-57444 Ha sido citado por 13 Publicaciones

Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 promoted pro-angiogenic capacity of periodontal ligament stem cells via HIF-1α/YAP signaling in periodontitis [ Stem Cell Res Ther, 2025, 16(1):271]	PubMed: 40457476
Deficiency of UCHL1 results in insufficient decidualization accompanied by impaired dNK modulation and eventually miscarriage [ J Transl Med, 2024, 22(1):478]	PubMed: 38769534
The Suppression of Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L1 Promotes the Transdifferentiation of Auditory Supporting Cells into Hair Cells by Regulating the mTOR Pathway [ Cells, 2024, 13(9)737]	PubMed: 38727276
Stem Cell Properties of Gastric Cancer Stem-Like Cells under Stress Conditions Are Regulated via the c-Fos/UCH-L3/β-Catenin Axis [ Mol Cells, 2023, 46(8):476-485]	PubMed: 37460253
UCHL1 regulates inflammation via MAPK and NF-κB pathways in LPS-activated macrophages [ Cell Biol Int, 2021, 10.1002/cbin.11662]	PubMed: 34288216
Long-term inhibition of UCHL1 decreases hypertension and retinopathy in spontaneously hypertensive rats [ J Int Med Res, 2021, 49(6):3000605211020641]	PubMed: 34130526
The Deubiquitinating Enzyme UCHL1 Promotes Resistance to Pemetrexed in Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating Thymidylate Synthase [ Theranostics, 2020, 15;10(13):6048-6060]	PubMed: 32483437
Deubiquitination of CD36 by UCHL1 promotes foam cell formation [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):636]	PubMed: 32801299
Blockage of UCHL1 Activity Attenuates Cardiac Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rats [ Hypertens Res, 2020, 10.1038/s41440-020-0486-1]	PubMed: 32541849
UCH-L1 inhibitor LDN-57444 hampers mouse oocyte maturation by regulating oxidative stress and mitochondrial function and reducing ERK1/2 expression [ Biosci Rep, 2020, 40(10)BSR20201308]	PubMed: 33030206

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