Ivacaftor (VX-770)

Ivacaftor (VX-770) (10 μM) aumenta significativamente la secreción de Cl^- estimulada por forskolina (I_T) en ~4 veces con una EC50 de 100 nM en las células tiroideas de rata Fisher (FRT) recombinantes que expresan la mutación de compuerta G551D de CFTR, y en ~6 veces con una EC50 de 25 nM en las células recombinantes que expresan la mutación de procesamiento F508del corregida por temperatura de CFTR. De acuerdo con los aumentos en la I_T estimulada por forskolina, este compuesto aumenta la probabilidad de apertura (P_o) de CFTR G551D-, F508del- y de tipo salvaje en ~6 veces, ~5 veces y ~2 veces, respectivamente, indicando que actúa directamente sobre CFTR para aumentar su actividad de compuerta. En epitelios bronquiales humanos (HBE) cultivados primariamente con CF que portan las mutaciones G551D y F508del de CFTR, Ivacaftor aumenta potentemente la I_T estimulada por forskolina en ~10 veces, de 5% a un nivel máximo de 48% de lo medido en HBE no CF, con una EC50 de 236 nM, mostrando una potencia ~70 veces mayor en comparación con el potenciador de CFTR comúnmente utilizado genisteína, que tiene una EC50 de 16 μM. En HBE con CFTR F508del homocigoto, provoca un aumento significativo en la I_T estimulada por forskolina con una EC50 de 22 nM, en menor medida del 4% al 16% de HBE no CF en comparación con el efecto en HBE G551D/F508del. Debido a la potenciación de CFTR, este compuesto inhibe la absorción excesiva de Na⁺ y líquidos mediada por ENaC con una IC50 de 43 nM, y disminuye la respuesta, lo que resulta en un aumento del líquido superficial y la frecuencia de batido ciliar (CBF) en HBE G551D/F508del. [1]

• Registros de cámara de Ussing

  El efecto de Ivacaftor (VX-770) sobre la secreción de Cl^- mediada por CFTR se caracteriza midiendo la I_T mediada por CFTR en cámaras utilizando células tiroideas de rata Fisher (FRT) recombinantes que expresan G551D o F508del CFTR. Las células se cultivan en insertos de cultivo celular Costar Snapwell mantenidos a 37 °C antes del registro. Los insertos de cultivo celular se montan en una cámara de Ussing para registrar la I_T en el modo de fijación de voltaje (V_hold = 0 mV). Para las células FRT, la membrana basolateral es un gradiente de Cl^- basolateral a apical. La solución de baño basolateral contiene 135 mM de NaCl, 1,2 mM de CaCl₂, 1,2 mM de MgCl₂, 2,4 mM de K₂HPO₄, 0,6 mM de KHPO₄, 10 mM de N-2-hidroxietilpiperazina-N

• Líneas celulares

  FRT and NIH 3T3 cells

• Concentraciones

  100/25 nM

• Tiempo de incubación

  24 h

• Método

  Cells were treated with various concentrations of Ivacaftor (VX-770).

• Modelos animales

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosificaciones

  3 mg/kg

• Administración

  i.v.