Capmatinib (INC280)

INCB28060 exhibe una potencia enzimática picomolar y es altamente específico para c-MET con una selectividad más de 10.000 veces superior a la de un amplio panel de quinasas humanas. Este compuesto inhibe la fosforilación de c-MET humano y la señalización mediada por c-MET en células cancerosas. Inhibe la proliferación y supervivencia celular dependientes de c-MET, y previene el crecimiento de células cancerosas independientes del anclaje y la migración celular. [1]

INCB28060 muestra una fuerte actividad antitumoral en modelos tumorales de ratón dependientes de c-MET, incluso el tratamiento oral de 0,03 mg/kg de este compuesto causa aproximadamente un 50% de inhibición de la fosforilación de c-MET. Se observa una inhibición dosis-dependiente del crecimiento tumoral en ratones portadores de tumores. [1]

• Ensayo de c-Met Quinasa

  El tampón de ensayo contiene 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 5mM DTT, pH 7,8. Para HTS, se puntean 0,8 μL de 5 mM de este compuesto disuelto en DMSO en placas de 384 pocillos. La titulación de DMSO sugiere que la concentración máxima tolerada del disolvente es del 4%. Para medir las IC50, la placa de INCB28060 se prepara mediante diluciones en serie de 3 veces y 11 puntos. Se transfieren 0,8 μL de este producto químico en DMSO de la placa de INCB28060 a la placa de ensayo. La concentración final de DMSO es del 2%. Se preparan soluciones de 8 nM de c-Met no fosforilado o 0,5 nM de c-Met fosforilado en tampón de ensayo. Una solución madre de 1 mM del péptido sustrato Biotin-EQEDEPEGDYFEWLE-amida disuelta en DMSO se diluye a 1 μM en tampón de ensayo que contiene 400 μM de ATP (c-Met no fosforilado) o 160 uM de ATP (c-Met fosforilado). Se añade un volumen de 20 μL de solución enzimática (o tampón de ensayo para el blanco enzimático) a los pocillos apropiados de cada placa y luego 20 μL/pocillo de solución de sustrato para iniciar la reacción. La placa se protege de la luz y se incuba a 25 °C durante 90 minutos. La reacción se detiene añadiendo 20 μL de una solución que contiene 45 mM de EDTA, 50 mM de Tris-HCl, 50 mM de NaCl, 0,4 mg/ml de BSA, 200 nM de SA-APC y 3 nM de EUPy20. La placa se incuba durante 15-30 minutos a temperatura ambiente y se mide la HTRF (fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea) en un instrumento Perkin Elmer Fusion α-FP. Los ajustes del programa HTRF utilizados son los siguientes: Filtro de excitación primaria 330/30, Ventana primaria: 200 μSeg, Retardo primario: 50 μSeg, Número de flashes: 15, Tiempo de lectura del pocillo: 2000

• Líneas celulares

  H441 cells

• Concentraciones

  0.24, 1, 4, 16, 63 nM

• Tiempo de incubación

  24 hours

• Método

  H441 cells are seeded in RPMI-1640 medium containing 10% FBS and grown to complete confluence. Gaps are introduced by scraping cells with a P200 pipette tip. Cells are then stimulated with 50 ng/mL recombinant human HGF to induce migration across the gap in the presence of various concentrations of this compound. After an overnight incubation, representative photographs are taken and a semiqualitative assessment of inhibition of cell migration is conducted.

• Modelos animales

  Eight-week-old female Balb/c nu/nu mice (Charles River) are inoculated subcutaneously with 4 × 10⁶ tumor cells (S114 model) or with 5 × 10⁶ tumor cells (U-87MG glioblastoma model).

• Dosificaciones

  3, 10, 30 mg/kg

• Administración

  INCB28060 is orally dosed, twice each day.