CAL-101 (Idelalisib)

Idelalisib (CAL-101) no es sensible a otras subunidades de la clase I de PI3K, incluyendo p110α, p110β y p110γ. Bloquea específicamente la expresión de CD63 mediada por FcϵR1 p110δ con una EC50 de 8 nM en basófilos primarios. Este compuesto exhibe una mayor actividad en células de leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL) y leucemia linfocítica crónica (CLL) en comparación con células de leucemia mieloide aguda (AML) y neoplasia mieloproliferativa (MPN). Produce la reducción de pAktS473, pAktT308 y el objetivo corriente abajo S6 en células SU-DHL-5, KARPAS-422 y CCRF-SB con una EC50 de 0,1 a 1,0 μM. [1]

Induce citotoxicidad selectiva en células de CLL independientemente del estado mutacional de IgVH o la citogenética de interfase, principalmente a través de un mecanismo dependiente de caspasas. El compuesto induce citotoxicidad preferentemente en células de CLL en comparación con linfocitos B normales, sin producir citotoxicidad en otras células hematopoyéticas, en comparación con LY294002. Carece de potencial citotóxico directo sobre células T y células asesinas naturales (NK). Puede inhibir la producción de citocinas inflamatorias, como IL-6, IL-10, TNF-α e IFN-γ, y citocinas inducidas por la activación, como CD40L. También antagoniza la supervivencia de células de CLL mediada por CD40L. [2]

Induce una acumulación de células en G1 y una disminución en la población de fase S en células L1236 y L591, lo que indica que este compuesto es una nueva estrategia para el tratamiento del linfoma de Hodgkin (HL). [3]

• Ensayo de PI3K

  El ensayo de PI3K se realiza en lisados de células enteras de CLL o linfocitos B normales. Se realiza un ensayo ELISA de PI3K. Brevemente, los extractos de células enteras se añaden a una mezcla de sustrato de PI(4,5)P2 y tampón de reacción que contiene adenosina trifosfato (ATP) y se incuban a temperatura ambiente. La reacción se detiene añadiendo detector de PI(3,4,5)P3 mezclado con EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y se incuba a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de este tiempo, la mezcla se transfiere de cada pocillo a una placa ELISA de PI3K y se incuba durante 1 hora. Las placas se lavan y luego se incuban con un detector secundario durante 30 minutos. Las placas se lavan de nuevo, y se añade una solución de 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina durante 5 minutos, momento en el que se añade H2SO4 para detener todas las reacciones. Las placas se leen a 450 nm en un lector de placas de 96 pocillos de Labsystems.

• Líneas celulares

  CLL B cells or healthy volunteer T cells or NK cells

• Concentraciones

  0.01-100 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  MTT assays are performed to determine cytotoxicity. 1 × 10⁵ cells are incubated with Idelalisib (CAL-101). MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 20 hours before washing in phosphate-buffered saline. DMSO is added, and absorbance is measured by spectrophotometry at 540 nm in a Labsystems plate reader. Cell viability is also measured at various time points with the use of annexin/PI flow cytometry. Data are analyzed. At least 104 cells are counted for each sample. Results are expressed as the percentage of total positive cells over untreated control. Experiments examining caspase-dependent apoptosis included the addition of 100 μM Z-VAD. Experiments examining survival signals include the addition of 1 μg/mL CD40L, 800 U/mL IL-4, 50 ng/mL BAFF, 20 ng/mL TNF-α, or coculturing on fibronectin or stromal (HS-5 cell line) coated plates. Stromal coculture is done by plating a 75-cm² flask (80%-100% confluent) per 6-well plate 24 hours before the addition of CLL cells.