HTH-01-015

N.º de catálogoS7318 Lote:S731803

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₆H₂₈N₈O

Peso molecular

468.55

Número CAS

1613724-42-7

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

47 mg/mL (100.3 mM)

Ethanol

40 mg/mL (85.36 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	2.350mg/ml (5.02mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 47 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL Tween80 to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 500 μL ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1.200mg/ml (2.56mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 24 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

HTH-01-015 es un potente y selectivo inhibidor de NUAK1 con una IC50 de 100 nM, con una selectividad >100 veces mayor sobre NUAK2.

Objetivos

NUAK1

100 nM

In vitro

En células HEK-293 que expresan NUAK1 y NUAK2, HTH-01-015 suprime la fosforilación de MYPT1 mediada por NUAK1. Este compuesto suprime la migración celular en MEFs NUAK1+/+ e inhibe la invasión de células U2OS. Además, inhibe la proliferación celular en ambas líneas celulares. Este inhibidor restringió notablemente la entrada de células en mitosis en las células U2OS.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos de actividad quinasa Las actividades in vitro de GST–NUAK1 purificado y GST–NUAK1[A195T] se miden utilizando el recuento de Cherenkov de la incorporación de 32P radiactivo de [γ-³²P]ATP en el péptido sustrato Sakamototide. Las reacciones se llevan a cabo en un volumen de reacción de 50 μL durante 30 min a 30°C y las reacciones se terminan goteando 40 μL de la mezcla de reacción sobre papel P81 e inmediatamente sumergiéndolas en ácido ortofosfórico 50 mM. Las muestras se lavan tres veces en ácido ortofosfórico 50 mM, seguido de un único enjuague con acetona y secado al aire. La incorporación de [γ-³²P]ATP en Sakamototide mediada por la quinasa se cuantifica mediante recuento de Cherenkov. Una unidad de actividad se define como aquella que cataliza la incorporación de 1 nmol de [³²P]fosfato en el sustrato durante 1 h.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares U2OS cells and MEFs Concentraciones 10 μM Tiempo de incubación 5 days Método Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer's protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos de actividad quinasa
Las actividades in vitro de GST–NUAK1 purificado y GST–NUAK1[A195T] se miden utilizando el recuento de Cherenkov de la incorporación de 32P radiactivo de [γ-³²P]ATP en el péptido sustrato Sakamototide. Las reacciones se llevan a cabo en un volumen de reacción de 50 μL durante 30 min a 30°C y las reacciones se terminan goteando 40 μL de la mezcla de reacción sobre papel P81 e inmediatamente sumergiéndolas en ácido ortofosfórico 50 mM. Las muestras se lavan tres veces en ácido ortofosfórico 50 mM, seguido de un único enjuague con acetona y secado al aire. La incorporación de [γ-³²P]ATP en Sakamototide mediada por la quinasa se cuantifica mediante recuento de Cherenkov. Una unidad de actividad se define como aquella que cataliza la incorporación de 1 nmol de [³²P]fosfato en el sustrato durante 1 h.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
U2OS cells and MEFs
Concentraciones
10 μM
Tiempo de incubación
5 days
Método
Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer's protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24171924/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24785407/

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , Brain Behav Immun, 2017, doi: 10.1016/j.bbi.2017.11.003 ]

Sellecks HTH-01-015 Ha sido citado por 3 Publicaciones

Localized Inhibition of Protein Phosphatase 1 by NUAK1 Promotes Spliceosome Activity and Reveals a MYC-Sensitive Feedback Control of Transcription. [ Mol Cell, 2020, 77(6):1322-1339]	PubMed: 32006464
Development of MAP4 Kinase Inhibitors as Motor Neuron-Protecting Agents. [ Cell Chem Biol, 2019, 10.1016/j.chembiol.2019.10.005]	PubMed: 31676236
Functional genomics identifies specific vulnerabilities in PTEN-deficient breast cancer [ Breast Cancer Res, 2018, 20(1):22]	PubMed: 29566768

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