HS-173

HS-173 muestra potentes efectos antiproliferativos en células T47D, SK-BR3 y MCF7 con una IC50 de 0,6, 1,5 y 7,8 μM, respectivamente. [1] Este compuesto causa una supresión completa de la vía PI3K en líneas celulares cancerosas (Hep3B y SkBr3). Además, induce la apoptosis celular al afectar la distribución del ciclo celular y activar las caspasas, y bloquea la angiogénesis inducida por VEGF in vitro. [2]

HS-173 disminuye la formación de vasos sanguíneos en ratones. [2] Este compuesto atenúa marcadamente el desarrollo de fibrosis hepática al bloquear la señalización de PI3K/Akt in vivo. [4]

• Ensayo de PI3-Quinasa

  El ensayo de PI3K se realiza utilizando el kit de ensayo de quinasa luminiscente Kinase-Glo Max, que cuantifica la cantidad de ADP producida por la reacción de PI3K. En resumen, una PI3K activa (100 ng) se preincuba con este compuesto durante 5 min en un tampón de reacción de quinasa (25 mM MOPS [pH 7.0], 5 mM MgCl₂ y 1 mM EGTA) y 10 μg de l-α-fosfatidilinositol (PI). Antes de la adición de PI, se sonica con un tampón de sonicación (25 mM MOPS [pH 7.0], 1 mM EGTA) en agua durante 20 min para permitir la formación de micelas. Luego, la reacción se inicia con la adición de 10 μM de ATP y se mantiene durante 180 min. Para terminar la reacción de quinasa, se añade el mismo volumen de tampón Kinase-Glo Max. Después de 10 min, las placas se leen en un lector de placas GloMax para la detección de luminiscencia.

• Líneas celulares

  T47D, SK-BR3, MCF7 cells

• Concentraciones

  ~50 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Cell viability is performed by a MTT assay. Briefly, T47D cells are plated in 96-well plates for 24 h. Then, the medium is removed and cells were treated with either DMSO as a control or various concentrations of inhibitors. The final concentration of DMSO in the medium was ≤0.1% (v/v). After the cells are incubated for 48 h, 20 μL MTT solution (5 mg/mL) is added to each well for another 4 h at 37 °C. The formazan crystals that formed are dissolved in DMSO (100 μL/well) by constant shaking for 5 min. The plate is then read on a microplate reader at 540 nm. Three replicate wells are used for each analysis. The median inhibitory concentration (IC50, defined as the drug concentration at which cell growth is inhibited by 50%) is assessed from the dose−response curves. To assess the effect of compounds on cell proliferation, T47D cells are cultured with this compound (0.1−100 μM) for 48 h before MTT analysis.

• Modelos animales

  Male BALB/c mice with CCl4-induced liver fibrosis

• Dosificaciones

  ~20 mg/kg

• Administración

  p.o.