HS-1371

N.º de catálogoS8775 Lote:S877501

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₄H₂₄N₄O

Peso molecular

384.47

Número CAS

2158197-70-5

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

13 mg/mL (33.81 mM)

Ethanol

4 mg/mL (10.4 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

HS-1371 es un potente inhibidor de RIP3 kinase con una IC50 de 20.8 nM. Se une al bolsillo de unión de ATP de RIP3 e inhibe la unión de ATP para prevenir la actividad enzimática de RIP3 in vitro.

Objetivos

RIP3 kinase

20.8 nM

In vitro

HS-1371 muestra un efecto inhibidor sobre la autofosforilación S227 de RIP3 a nivel basal. Muestra un efecto inhibidor completo sobre la señalización de necroptosis inducida por TNF, sin mostrar fosforilación de RIP3 y MLKL en células HT-29. La inhibición de la actividad de RIP3 kinase por este compuesto bloquea la formación del complejo necrosoma, mostrando la interrupción del reclutamiento de MLKL. Este químico rescata las células de la necroptosis inducida por TNF. Rescata las células de la muerte celular necroptótica dependiente de RIP3 pero no de la muerte celular Apoptosis.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos enzimáticos Las actividades inhibidoras de todos los compuestos hacia RIP3 se midieron en Reaction Biology Corp mediante ensayos de quinasa radiométricos ([γ-32P]ATP). La actividad enzimática de RIP3 se monitorizó usando 20 μM de proteína básica de mielina (MBP) disuelta en tampón de reacción recién preparado (20 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.02% BRIJ-35, 0.02 mg/mL BSA, 0.1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO). Cada inhibidor putativo de RIP3 se disolvió en 100% DMSO a concentraciones específicas y se diluyó en serie con epMotion 5070 en DMSO. Se añadieron RIP3 humana y 20 μM de péptido sustrato (MBP) al tampón de reacción. Después de añadir el inhibidor candidato disuelto en DMSO a la mezcla de reacción de la quinasa utilizando tecnología acústica (Echo550; rango de nanolitros), la mezcla de reacción se incubó durante 20 min a temperatura ambiente. Para iniciar la reacción enzimática, se añadió 33P-ATP con una actividad específica de 10 μCi/μL a la mezcla de reacción para alcanzar una concentración final de ATP de 10 μM. La radioactividad se monitorizó entonces utilizando el método de unión por filtro después de la incubación de la mezcla de reacción durante 2 h a temperatura ambiente. A concentraciones dadas de inhibidor, la potencia bioquímica se midió por el porcentaje de actividad quinasa restante con respecto a la reacción del vehículo (dimetilsulfóxido). Los ajustes de curva y los valores de IC50 se obtuvieron entonces utilizando el programa PRISM. El inhibidor competitivo de ATP estaurosporina (STSP) se empleó como control positivo en este estudio debido a su alta potencia bioquímica contra diversas quinasas, incluida RIP3.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares HT-29 cells Concentraciones 5 μM Tiempo de incubación 2 h Método HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos enzimáticos
Las actividades inhibidoras de todos los compuestos hacia RIP3 se midieron en Reaction Biology Corp mediante ensayos de quinasa radiométricos ([γ-32P]ATP). La actividad enzimática de RIP3 se monitorizó usando 20 μM de proteína básica de mielina (MBP) disuelta en tampón de reacción recién preparado (20 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.02% BRIJ-35, 0.02 mg/mL BSA, 0.1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO). Cada inhibidor putativo de RIP3 se disolvió en 100% DMSO a concentraciones específicas y se diluyó en serie con epMotion 5070 en DMSO. Se añadieron RIP3 humana y 20 μM de péptido sustrato (MBP) al tampón de reacción. Después de añadir el inhibidor candidato disuelto en DMSO a la mezcla de reacción de la quinasa utilizando tecnología acústica (Echo550; rango de nanolitros), la mezcla de reacción se incubó durante 20 min a temperatura ambiente. Para iniciar la reacción enzimática, se añadió 33P-ATP con una actividad específica de 10 μCi/μL a la mezcla de reacción para alcanzar una concentración final de ATP de 10 μM. La radioactividad se monitorizó entonces utilizando el método de unión por filtro después de la incubación de la mezcla de reacción durante 2 h a temperatura ambiente. A concentraciones dadas de inhibidor, la potencia bioquímica se midió por el porcentaje de actividad quinasa restante con respecto a la reacción del vehículo (dimetilsulfóxido). Los ajustes de curva y los valores de IC50 se obtuvieron entonces utilizando el programa PRISM. El inhibidor competitivo de ATP estaurosporina (STSP) se empleó como control positivo en este estudio debido a su alta potencia bioquímica contra diversas quinasas, incluida RIP3.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
HT-29 cells
Concentraciones
5 μM
Tiempo de incubación
2 h
Método
HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30237400/

Sellecks HS-1371 Ha sido citado por 3 Publicaciones

MRE11 liberates cGAS from nucleosome sequestration during tumorigenesis [ Nature, 2024, 625(7995):585-592]	PubMed: 38200309
Necroptotic virotherapy of oncolytic alphavirus M1 cooperated with Doxorubicin displays promising therapeutic efficacy in TNBC [ Oncogene, 2021, 10.1038/s41388-021-01869-4]	PubMed: 34155344
Inhibition of Cardiac RIP3 Mitigates Early Reperfusion Injury and Calcium-Induced Mitochondrial Swelling without Altering Necroptotic Signalling [ Int J Mol Sci, 2021, 22(15)7983]	PubMed: 34360749

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