GW9662

GW9662 se une a Cys(285) en PPARgamma, que está conservado entre los tres PPAR. Este compuesto actúa como un antagonista de PPARgamma, lo que se confirma en un ensayo de inhibición de la diferenciación de adipocitos. [1] Previene la activación de PPARγ e inhibe el crecimiento de líneas celulares de tumores mamarios humanos (MCF7, MDA-MB-468, MDA-MB-231) con una IC50 de 20 μM-30 μM, lo que sugiere la existencia de propiedades agonistas de PPARγ de esta sustancia química o mecanismos inhibidores del crecimiento independientes de PPARγ. El cotratamiento con este compuesto (10 μM) resulta en un número de células viables estadísticamente menor después de 7 días en células MDA-MB-231. [2] Los ligandos de PPARγ1 podrían suprimir la formación de osteoclastos inducida por RANKL en células mieloides murinas primarias (BMs) y RAW264.7. Es importante destacar que la supresión por estos ligandos se revierte de forma dependiente de la concentración con esta sustancia química (2 μM). Este (2 μM) bloquea la supresión de la formación de osteoclastos por IL-4 en BMs. Este compuesto (1 μM) bloquea la activación de NF-κB por RANKL en células RAW264.7. [3] GW9662 (10 μM) inhibe la adipogénesis inducida por hormonas y agonistas de preadipocitos primarios de pacientes con enfermedad ocular tiroidea. [4]

El pretratamiento con LPS (1 mg/kg i.p.) atenúa significativamente todos los marcadores de lesión y disfunción renal causados por la lesión de isquemia/reperfusión (I/R) en ratas. En particular, este compuesto (1 mg/kg i.p.) anula los efectos protectores del LPS. [5]

• Ensayo de unión

  Los dominios de unión a ligando (LBDs) de PPARα, PPARγ y PPARδ humanos se expresan en E. coli como proteínas de fusión con etiqueta de polihistidina. Los receptores se inmovilizan en perlas SPA mediante la adición del receptor deseado (15 nM) a una suspensión de perlas SPA modificadas con estreptavidina (0,5 mg/mL) en tampón de ensayo. La mezcla se deja equilibrar durante al menos 1 hora a temperatura ambiente, y las perlas se precipitan por centrifugación a 1×10³ g. El sobrenadante se desecha, y las perlas se resuspenden en el volumen original de tampón de ensayo fresco con agitación suave. El procedimiento de centrifugación/resuspensión se repite, y la suspensión resultante de perlas recubiertas de receptor se utiliza inmediatamente o se almacena a 4 ℃ durante un máximo de 1 semana antes de su uso. Se utilizan [3H]GW2443 como radioligandos para la determinación de la unión competitiva a PPARα, PPARγ y PPARδ, respectivamente. A menos que se indique lo contrario, el tampón utilizado para todos los ensayos es 50 mM HEPES (pH 7), 50 mM NaCl, 5 mM CHAPS, 0,1 mg/mL BSA y 10 mM DTT. Para algunos experimentos, el HEPES (pH 7) se reemplaza por 50 mM Tris (pH 8).

• Líneas celulares

  MDA-MB-231 cells

• Concentraciones

  10 μM

• Tiempo de incubación

  10 days

• Método

  MDA-MB-231 cells are seeded at a density of 1 × 10⁵ cells per 25 cm³ tissue culture flask. After 24 h (day 0), the growth medium is replaced with fresh medium containing GW9662 (10 μM) or both together. Control flasks receives 0.1% DMSO. Cells are harvested on days 0, 3, 5, 7, 10 for each treatment condition by trypsinisation, stained using trypan blue, and the total and viable number of cells per flask calculates using a haemocytometer.

• Modelos animales

  male Wistar rats

• Dosificaciones

  1 mg/kg

• Administración

  intraperitoneal injection