GW5074

GW5074 es un inhibidor potente y específico de c-Raf con una IC50 de 9 nM y no tiene efecto sobre MKK6, MKK7, p38 MAP quinasa y cdks in vitro. Sin embargo, el tratamiento de cultivos neuronales con este compuesto permite la acumulación de modificaciones activadoras en c-Raf y también en B-Raf. La inhibición de la apoptosis inducida por LK por este inhibidor en las neuronas granulares cerebelosas no es dependiente de MEK-ERK. Este químico retrasa la regulación negativa de la actividad de Akt pero inhibe la apoptosis por un mecanismo independiente de Akt. Afecta a Ras, al factor nuclear-kappa B y a c-jun. Este compuesto inhibe la muerte celular causada por neurotoxinas en células granulares y otros tipos neuronales. [1]

GW5074 es protector en un modelo experimental in vivo de la enfermedad de Huntington. Este compuesto (5 mg/Kg) previno completamente las extensas lesiones estriatales bilaterales inducidas por 3-NP en ratones. [1]  Suprime la hiperreactividad de las vías respiratorias inducida por el humo de segunda mano en ratones. [3]

• Determinación de la afinidad

  En general, los ensayos de quinasas in vitro se realizan utilizando quinasas purificadas y sustratos sintéticos en condiciones estándar utilizando el servicio de Perfilado de Quinasas de Upstate Biotechnology. En resumen, para cada ensayo se utilizan 5-10 mU de quinasa purificada. Para GSK3β, cdk1, cdk2, cdk3, cdk5, la quinasa se incuba con 1 μM de GW5074 en un tampón que contiene 8 mM de MOPS, pH 7,2, 0,2 mM de EDTA, 10 mM de acetato de magnesio y [c- ³³P-ATP] durante 40 min a temperatura ambiente. La actividad de la quinasa se cuantifica midiendo la incorporación de ³³P mediante la aplicación de una alícuota en filtros P30, lavado en ácido fosfórico 50 mM y recuento por centelleo. La composición del tampón para c-Raf, JNK1, JNK2, JNK3, MEK1, MKK6, MKK7 es 50 mM Tris pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 10 mM de acetato de magnesio y [c- ³³P-ATP]. Los sustratos peptídicos utilizados son los siguientes: Para c-Raf, 0,66 mg/mL de MBP; para cdks, 0,1 mg/mL de histona H1; para JNKs, 3 μM de ATF2; para MEK1, 1 μM de MAPK2; para MKK6, 1 μM de SAPK2a y para MKK7, 2 μM de JNK1α.

• Líneas celulares

  Cortical neurons

• Concentraciones

  ~5 μM

• Tiempo de incubación

  24 hours

• Método

  HCA is diluted from 100-fold concentrated solutions that are adjusted to pH 7.5. To evaluate the effects of GW5074 on HCA-induced cytotoxicity, this compound is added at the time cortical neurons are exposed to HCA. Viability is assessed 24 h later.

• Modelos animales

  Eight-week-old C57BL/6 male mice administered with 50–55 mg/kg 3-NP

• Dosificaciones

  0.5–10 mg/kg

• Administración

  i.p.