GSK650394

N.º de catálogoS7209 Lote:S720902

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Datos técnicos

Fórmula

C25H22N2O2
Peso molecular 382.45 Número CAS 890842-28-1
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 76 mg/mL (198.71 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción El GSK650394 es un inhibidor de la cinasa 1 regulada por el suero y los glucocorticoides con un IC50 de 62 nM y 103 nM para SGK1 y SGK2, respectivamente.
Objetivos
SGK1
(Cell-free assay)		 SGK2
(Cell-free assay)
62 nM 103 nM
In vitro El GSK650394 inhibe el transporte epitelial mediado por SGK1 con un IC50 de 0,6 μM en el ensayo SCC. En las células LNCaP, este compuesto inhibe la potenciación mediada por andrógenos de la fosforilación de Nedd4-2 y el crecimiento celular mediado por andrógenos.Esta sustancia química contrarresta la disminución de la neurogénesis inducida por el cortisol, los cambios en la señalización de Hedgehog y la translocación nuclear del GR. [2] Inhibe la replicación del virus de la gripe al impedir la exportación de vRNP de la gripe al citoplasma de las células A549.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo de proximidad por centelleo (SPA)

    SGK1 S422D (60-431 aa; concentración final de 0,275 μg/mL) o SGK2 (concentración final de 0,875 μg/mL) se activan mediante PDK1 (concentración final de 1,1 μg/mL) en un tampón compuesto por 50 mM Tris (pH 7,5), 0,1 mM de EGTA, 0,1 mM de EDTA, 10 mM de MgCl2, 0,1 % de β-mercaptoetanol, 1 mg/mL de BSA y ATP (concentración final de 0,15 mM) y se incuban durante 30 minutos a 30 °C. SGK2 se prepara exactamente como se describe para SGK1, excepto que corresponde a la proteína de longitud completa. Se prepara una solución que contiene péptido CROSStide biotinilado a una concentración final de 75 μM y γ32P-ATP correspondiente a 2×106 cpm en el tampón de reacción. En una placa de 96 pocillos, se añaden 5 μL de este compuesto a 25 μL de la mezcla enzimática activada. A esto se añaden 20 μL de la mezcla CROSStide y se incuba durante 1 h a temperatura ambiente. A continuación, se añaden 50 μL de una suspensión de 25 mg/mL de perlas SPA recubiertas de estreptavidina en PBS con 0,1 M de EDTA, pH 8,0. A continuación, se sella la placa y se centrifuga durante 8 minutos a 2000 rpm, y se detecta la señal midiendo durante 30 segundos/pocillo en un contador de centelleo Packard TopCount NXT. Los valores IC50 de la inhibición de las actividades SGK1 y SGK2 por este compuesto químico se calculan a partir de estos datos utilizando el software GraphPad Prism 3.
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    LNCaP cells

  • Concentraciones

    ~10 μM

  • Tiempo de incubación

    7 days

  • Método

    LNCaP cells are plated at a density of 5,000 cells per well in 96-well plates in 100 μL PRF-RPMI 1640, supplemented with 8% CS-FBS, 0.1 mM NEAA, and 1 mM NaPyr. At day three, cells are treated with hormone with or without GSK650394 by removing 50 μL of the media and replacing this with 50 μL of PRF-RPMI 1640 with 8% CS-FBS, NEAA, NaPyr containing a 2X concentration of the appropriate hormone/this compound treatment. At days 5 and 7, the treatment is repeated. On the tenth day, the media is removed and the relative cell number is measured using the FluoReporter Blue assay according to the manufacturer’s instructions.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794135/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23650397/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23487453/

Validación de productos por parte del cliente

BV-2 cells were incubated in the absence or presence of gsk650394 (1 μM) for 30 min, followed by LPS (500 ng/ml) administration for 30 min, and then fixed. NF-κB p65 protein was visualized by indirect immunofluorescence staining using an antibody for NF-κB p65. For nuclear staining, the cells were stained with DAPI. Bar = 20 μm.

Datos de [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 478(1):53-59 ]

GSK650394 treatment reduces steady state levels of BoHV-1 proteins. Cells were grown prior to infection. Three hours prior to infection 25 nM of GSK650394 was added to the designated cultures. CRIB cells were infected withBoHV-1 (moi=2) and then stripped FBS added. At the designated times after infection (hours), whole cell lysate (50 ug protein) was prepared and Western Blots performedusing the designated antibodies directed against a viral protein. Arrows denote the position of bICP0 (97 kD), bICP4 (178 kD), bICP22 (45 kD), VP16 (65 kD), and the bracketdenotes various gE forms. Tubulin was used as a loading control. The lane marked M are molecular weight markers: numbers to left are the approximate size of the respectivebands. These results are representative of 4 independent experiments. The relative levels of the respective BoHV-1 proteins were estimated by comparing the intensity ofthe bands to tubulin using a BioRad ChemiDoc MP and PMI System. The value of the respective viral protein that was first detected after infection was set at 10 and the othervalues normalized to this value. ND refers to those lanes in which the viral protein was not detected. These results are representative of three independent experiments.

Datos de [ , , Virus Res, 2016, 222:106-112. ]

Sellecks GSK650394 Ha sido citado por 24 Publicaciones

Patient-derived enteroids provide a platform for the development of therapeutic approaches in microvillus inclusion disease [ J Clin Invest, 2023, 133(20)e169234] PubMed: 37643022
Bacterial DNA promoting inflammation via the Sgk1/Nedd4L/Syk pathway in mast cells contributes to antihistamine non-responsive CSU [ J Leukoc Biol, 2023, qiad025] PubMed: 36857592
Estrogen-sensitive activation of SGK1 induces M2 macrophages with anti-inflammatory properties and a Th2 response at the maternal-fetal interface [ Reprod Biol Endocrinol, 2023, 21(1):50] PubMed: 37226177
Inhibition of SGK1 potentiates the anticancer activity of PI3K inhibitor in NSCLC cells through modulation of mTORC1, p‑ERK and β‑catenin signaling [ Biomed Rep, 2023, 19(6):94] PubMed: 37901878
Therapy Development for Microvillus Inclusion Disease using Patient-derived Enteroids [ bioRxiv, 2023, 2023.01.28.526036] PubMed: 36747680
Activation of Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 1/Nuclear Factor-κB Pathway Are Correlated with Low Sensitivity to Bortezomib and Ixazomib in Resistant Multiple Myeloma Cells [ Biomedicines, 2021, 9(1)E33] PubMed: 33406639
Identification and Kinetic Characterization of Serum- and Glucocorticoid-Regulated Kinase Inhibitors Using a Fluorescence Polarization-Based Assay [ SLAS Discov, 2021, 24725552211002465] PubMed: 33783250
Crosstalk between Hedgehog pathway and the glucocorticoid receptor pathway as a basis for combination therapy in T-cell acute lymphoblastic leukemia [ Oncogene, 2020, 10.1038/s41388-020-01453-2] PubMed: 32917954
Convergent genomic and pharmacological evidence of PI3K/GSK3 signaling alterations in neurons from schizophrenia patients [ Neuropsychopharmacology, 2020, 10.1038/s41386-020-00924-0] PubMed: 33288841
Targeting histone K4 trimethylation for treatment of cognitive and synaptic deficits in mouse models of Alzheimer's disease [ Sci Adv, 2020, 6(50)eabc8096] PubMed: 33298440

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