GSK3787

GSK3787 antagoniza irreversiblemente el PPARδ humano y de ratón que modifica covalentemente Cys249 dentro del bolsillo de unión del ligando. Este compuesto (1 μM) antagoniza eficazmente la transcripción estimulada por el agonista GW0742 de CPT1a y PDK4 en células musculares esqueléticas humanas, y antagoniza eficazmente la expresión génica basal de CPT1a. No muestra una actividad antiproliferativa eficaz contra las células de cáncer colorrectal. [1]

Esta sustancia química (1 μM) antagoniza completamente la expresión génica de Angptl4 dependiente de PPARβ/δ inducida por 50 nM de GW0742 en fibroblastos de tipo salvaje y en queratinocitos. Esta sustancia (1 μM) antagoniza en gran medida la expresión de ARNm de Angptl4 y Adrp inducida por 50 nM de GW0742 en la célula de cáncer de piel A341. Este compuesto (1 μM) antagoniza en gran medida la expresión de ARNm de Angptl4 inducida por GW0742 en las líneas celulares de cáncer MCF7 (mama), Huh7 (hígado) y HepG2 (hígado), pero no en las células H1838 o A549 (pulmón). Esta sustancia (1 μM) antagoniza en gran medida el aumento de ARNm de Adrp inducido por GW0742 en las células Huh7 y HepG2, pero no en las células H1838. Esta sustancia química no antagoniza la expresión basal de ninguno de estos dos genes diana de PPARβ/δ en estas células. Ni GW0742 ni este compuesto tienen ningún efecto sobre la proliferación celular de estas células a concentraciones que van de 0,1 a 10 μM. Es capaz de modular la asociación de los péptidos correguladores de PPARβ/δ y PPARγ en respuesta a la activación del ligando. La eficacia de esta sustancia química para modular la actividad de PPARγ es notablemente menor que su eficacia para actuar como antagonista de PPARβ/δ. [2]

GSK3787 antagoniza la expresión génica dependiente de PPARβ/δ inducida por ligando in vivo. La administración oral de este compuesto no tiene ningún efecto sobre la expresión de ARNm de Angptl4 y Adrp en el epitelio del colon de ratón. La coadministración de este químico (10 mg/kg) previene eficazmente la expresión inducida por GW0742 de ARNm de Angptl4 y Adrp en el epitelio del colon de ratones de tipo salvaje, lo que se correlaciona con una ocupación reducida del promotor de PPARβ/δ en los genes Angptl4 y Adrp. La administración de este compuesto no tuvo ningún efecto sobre la tolerancia a la glucosa. [2]

• Ensayo de unión por saturación

  Utilizando placas de cultivo de 96 pocillos, 50 nM de LBD de PPARG humano purificado y la concentración deseada de [³H]GW3738 se diluyen a un volumen total de 100 μL con un tampón que consiste en 50 mM KCl, 5 mM EDTA, 10 mM ditiotreitol (DTT), 50 mM HEPES, a pH 7. Los ensayos de unión por saturación se realizan utilizando concentraciones de este compuesto que van de 1 a 250 nM. La unión no específica a cada concentración de [³H]GW3738 se estima en incubaciones paralelas que contienen 50 μM de GW 3738 sin marcar. Las placas se incuban durante 2 h a temperatura ambiente. El ligando libre se separa del ligando unido al receptor mediante cromatografía de exclusión por tamaño utilizando columnas de centrifugación de 96 pocillos disponibles comercialmente. Las muestras (50 μL) de cada pocillo de una sola placa de prueba se cargan en un bloque de filtración en gel de 96 pocillos equilibrado con tampón y temperatura. El bloque se coloca sobre una microplaca limpia y se centrifuga a 1100 g durante 4 min. Se añade líquido de centelleo (180 μL) a cada pocillo de la placa que contiene el eluyente, y las placas se sellan y se dejan equilibrar durante al menos 4 h antes de contar en un contador. La cantidad de unión no específica a cada concentración de [³H]GW3738 se resta de todos los pocillos y se construyen gráficos de la concentración de este químico frente a los recuentos por minuto (cpm) unidos. Los valores de K_d para [³H]GW3738 se determinan a partir de un ajuste no lineal por mínimos cuadrados de los datos a un modelo de unión simple.