GSK343

N.º de catálogoS7164 Lote:S716402

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Datos técnicos

Fórmula

C₃₁H₃₉N₇O₂

Peso molecular

541.69

Número CAS

1346704-33-3

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

2 mg/mL (3.69 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

GSK343 es un inhibidor potente y selectivo de EZH2 con una IC50 de 4 nM en un ensayo sin células, mostrando una selectividad 60 veces mayor contra EZH1, y una selectividad >1000 veces mayor contra otras Histone Methyltransferase. GSK343 induce la Autophagy.

Objetivos

EZH2 (Cell-free assay)	EZH1 (Cell-free assay)
4 nM	240 nM

In vitro

GSK343 inhibe la trimetilación de H3K27 (H3K27me3) con una IC50 de 174 nM en células de cáncer de mama HCC1806. Este compuesto inhibe potentemente la proliferación celular en células de cáncer de mama y células de cáncer de próstata, y la línea celular de cáncer de próstata LNCaP es la más sensible a él, con una IC50 de 2,9 μM.

Este químico suprime significativamente el crecimiento de células EOC cultivadas en matriz extracelular (ECM) de matrigel 3D, que imita el microambiente tumoral in vivo. Además, también induce la apoptosis de células EOC en 3D e inhibe significativamente la invasión de células EOC.

In vivo

GSK343, un inhibidor selectivo de EZH2, inhibe la fagocitosis.

Características

Una sonda química para la iniciativa SGC Epigenetics. Uso potencial en una variedad de tumores sólidos.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos bioquímicos in vitro contra Histone Methyltransferase La actividad contra EZH2 se evalúa utilizando un complejo PRC2 de 5 miembros (Flag-EZH2, EED, SUZ12, AEBP2, RbAp48). El protocolo del ensayo se puede resumir de la siguiente manera: se preparan soluciones madre de compuestos de 10 mM a partir de sólidos en 100% de DMSO. Se prepara una placa maestra de dilución en serie de 11 puntos en formato de 384 pocillos (dilución 1:3, las columnas 6 y 18 fueron controles de DMSO de volumen igual) y se dispensa en placas listas para el ensayo utilizando tecnología de dispensación acústica para crear un sello de 100 nL de compuesto y controles de DMSO. Las adiciones al ensayo consistieron en adiciones de volumen igual de 10 nM de EZH2 y la solución de sustrato (5 Tµg/mL de nucleosomas de HeLa y 0,25 TµM de [³H]-SAM) dispensadas en las placas de ensayo utilizando un dispensador combi multidrop. Las placas de reacción se incuban durante 1 hora y se apagan con una adición de volumen igual de 0,5 mg/mL de perlas de imagen PS-PEI (RPNQ0098) que contienen 0,1 mM de SAM no marcado. Las placas se sellan, se adaptan a la oscuridad durante 30 minutos y se adquiere una imagen de luminiscencia de punto final de 5 minutos utilizando un generador de imágenes Viewlux. Las estadísticas de la placa, como Z’ y la relación señal/fondo, así como las curvas de dosis-respuesta, se analizan utilizando Activity BaseXE. La actividad bioquímica in vitro de EZH1 se evalúa como parte de un complejo PRC2 de 5 miembros utilizando un ensayo SPA de 384 pocillos idéntico a EZH2. Los componentes del tampón, la dispensación de reactivos, la preparación de la placa de compuestos, las condiciones de extinción y el análisis de datos son idénticos para EZH1 y EZH2 con concentraciones finales de ensayo de 20 nM de EZH1, 5 TµM/mL de nucleosomas de HeLa y 0,25 TµM de [³H]-SAM. El análisis de datos adicional, los pivotes de pIC50 y las visualizaciones son posibles gracias a TIBCO Spotfire. Este compuesto se perfila en Reaction Biology Corp. (Malvern, PA) para evaluar la inhibición en su panel de ensayos de Histone Methyltransferase. La actividad de la metiltransferasa se evalúa utilizando la tecnología HotSpot, un ensayo de unión por filtro miniaturizado basado en radioisótopos. Los inhibidores se disuelven en dimetilsulfóxido (DMSO) y se prueban a concentraciones de hasta 100 uM con una concentración final de DMSO del 2%. El tampón que contiene la metiltransferasa a la concentración indicada y su sustrato preferido, como se muestra en la tabla adjunta, se preincuba con esta sustancia química durante 10 minutos. Las reacciones se inician mediante la adición de 1 uM de S-adenosil-L-[metil-³H]metionina (SAM), se incuban durante 60 minutos a 30 °C y luego se transfieren a papel de filtro P81 y se lavan con PBS antes de la detección.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares Breast cancer cell lines (HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1), prostate cancer cell lines (DU145, PC3, LNCaP) Concentraciones ~50 μM Tiempo de incubación 6 days Método To account for varying doubling rates among cancer cell lines, the optimal cell seeding is determined empirically for all cell lines by examining their growth in a 384-well plate over 6 days with a wide range of seeding densities. Cells are then plated at the optimal seeding density and allowed to adhere overnight. Cells are treated in duplicate with a 20-point 2-fold dilution series of this compound or 0.147% DMSO (vehicle control) and incubated for 6 days at 37C in 5% CO2. Cells are then lysed with 25 μl CellTiter-Glo per well and chemiluminescence is quantified with a TECAN Safire2 microplate reader. In addition, an untreated plate of cells is harvested at the time of compound addition (T0) to quantify the starting number of cells. CTG values after 6 days of treatment were expressed as a percent of the T0 value and plotted against compound concentration. Data are fit with a 4-parameter equation to generate a concentration response curve and the concentration of compound required to inhibit 50% of growth (gIC50) is determined

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos bioquímicos in vitro contra Histone Methyltransferase
La actividad contra EZH2 se evalúa utilizando un complejo PRC2 de 5 miembros (Flag-EZH2, EED, SUZ12, AEBP2, RbAp48). El protocolo del ensayo se puede resumir de la siguiente manera: se preparan soluciones madre de compuestos de 10 mM a partir de sólidos en 100% de DMSO. Se prepara una placa maestra de dilución en serie de 11 puntos en formato de 384 pocillos (dilución 1:3, las columnas 6 y 18 fueron controles de DMSO de volumen igual) y se dispensa en placas listas para el ensayo utilizando tecnología de dispensación acústica para crear un sello de 100 nL de compuesto y controles de DMSO. Las adiciones al ensayo consistieron en adiciones de volumen igual de 10 nM de EZH2 y la solución de sustrato (5 Tµg/mL de nucleosomas de HeLa y 0,25 TµM de [³H]-SAM) dispensadas en las placas de ensayo utilizando un dispensador combi multidrop. Las placas de reacción se incuban durante 1 hora y se apagan con una adición de volumen igual de 0,5 mg/mL de perlas de imagen PS-PEI (RPNQ0098) que contienen 0,1 mM de SAM no marcado. Las placas se sellan, se adaptan a la oscuridad durante 30 minutos y se adquiere una imagen de luminiscencia de punto final de 5 minutos utilizando un generador de imágenes Viewlux. Las estadísticas de la placa, como Z’ y la relación señal/fondo, así como las curvas de dosis-respuesta, se analizan utilizando Activity BaseXE. La actividad bioquímica in vitro de EZH1 se evalúa como parte de un complejo PRC2 de 5 miembros utilizando un ensayo SPA de 384 pocillos idéntico a EZH2. Los componentes del tampón, la dispensación de reactivos, la preparación de la placa de compuestos, las condiciones de extinción y el análisis de datos son idénticos para EZH1 y EZH2 con concentraciones finales de ensayo de 20 nM de EZH1, 5 TµM/mL de nucleosomas de HeLa y 0,25 TµM de [³H]-SAM. El análisis de datos adicional, los pivotes de pIC50 y las visualizaciones son posibles gracias a TIBCO Spotfire. Este compuesto se perfila en Reaction Biology Corp. (Malvern, PA) para evaluar la inhibición en su panel de ensayos de Histone Methyltransferase. La actividad de la metiltransferasa se evalúa utilizando la tecnología HotSpot, un ensayo de unión por filtro miniaturizado basado en radioisótopos. Los inhibidores se disuelven en dimetilsulfóxido (DMSO) y se prueban a concentraciones de hasta 100 uM con una concentración final de DMSO del 2%. El tampón que contiene la metiltransferasa a la concentración indicada y su sustrato preferido, como se muestra en la tabla adjunta, se preincuba con esta sustancia química durante 10 minutos. Las reacciones se inician mediante la adición de 1 uM de S-adenosil-L-[metil-³H]metionina (SAM), se incuban durante 60 minutos a 30 °C y luego se transfieren a papel de filtro P81 y se lavan con PBS antes de la detección.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
Breast cancer cell lines (HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1), prostate cancer cell lines (DU145, PC3, LNCaP)
Concentraciones
~50 μM
Tiempo de incubación
6 days
Método
To account for varying doubling rates among cancer cell lines, the optimal cell seeding is determined empirically for all cell lines by examining their growth in a 384-well plate over 6 days with a wide range of seeding densities. Cells are then plated at the optimal seeding density and allowed to adhere overnight. Cells are treated in duplicate with a 20-point 2-fold dilution series of this compound or 0.147% DMSO (vehicle control) and incubated for 6 days at 37C in 5% CO2. Cells are then lysed with 25 μl CellTiter-Glo per well and chemiluminescence is quantified with a TECAN Safire2 microplate reader. In addition, an untreated plate of cells is harvested at the time of compound addition (T0) to quantify the starting number of cells. CTG values after 6 days of treatment were expressed as a percent of the T0 value and plotted against compound concentration. Data are fit with a 4-parameter equation to generate a concentration response curve and the concentration of compound required to inhibit 50% of growth (gIC50) is determined

Referencias

http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ml3003346
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23759589/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35265199/

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , Nucleic Acids Res, 2016, 44(16):7659-72. ]

: Datos de [ , , Oncogene, 2015, 10.1038/onc.2015.38 ]

: Datos de [ , , Mol Cancer, 2017, 16(1):5. ]

Sellecks GSK343 Ha sido citado por 63 Publicaciones

The establishment of nuclear organization in mouse embryos is orchestrated by multiple epigenetic pathways [ Cell, 2025, S0092-8674(25)00396-4]	PubMed: 40273908
Inhibition of Mitochondrial Fission Reverses Simulated Microgravity-Induced Osteoblast Dysfunction by Enhancing Mechanotransduction and Epigenetic Modification [ Research (Wash D C), 2025, 8:0602]	PubMed: 39906534
GSK343, an inhibitor of EZH2, prevents acquired cisplatin resistance in bladder cancer [ Mol Genet Genomics, 2025, 300(1):63]	PubMed: 40550924
Dietary phytosterols induce infertility in female mice via epigenomic modulations [ Commun Biol, 2024, 7(1):1535]	PubMed: 39562830
LINC01021 Attenuates Expression and Affects Alternative Splicing of a Subset of p53-Regulated Genes [ Cancers (Basel), 2024, 16(9)1639]	PubMed: 38730591
Select EZH2 inhibitors enhance viral mimicry effects of DNMT inhibition through a mechanism involving NFAT:AP-1 signaling [ Sci Adv, 2024, 10(13):eadk4423]	PubMed: 38536911
Polycomb repressor complex 2 suppresses interferon-responsive MHC-II expression in melanoma cells and is associated with anti-PD-1 resistance [ J Immunother Cancer, 2023, 11(11)e007736]	PubMed: 38315170
Targeting polycomb repressor complex 2-mediated bivalent promoter epigenetic silencing of secreted frizzled-related protein 1 inhibits cholangiocarcinoma progression [ Clin Transl Med, 2023, 13(12):e1502]	PubMed: 38050190
H3K27me3 of Rnf19a promotes neuroinflammatory response during Japanese encephalitis virus infection [ J Neuroinflammation, 2023, 20(1):168]	PubMed: 37480121
Inhibition of EED activity enhances cell survival of female germline stem cell and improves the oocytes production during oogenesis in vitro [ Open Biol, 2023, 13(1):220211]	PubMed: 36695089

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