GSK2334470

GSK2334470 inhibe a PDK1 de activar Akt1 de longitud completa en presencia de vesículas lipídicas que contienen PtdIns(3,4,5)P₃ o un mutante de Akt1 que carece del dominio PH (ΔPH-Akt1) con una IC50 de ~10 nM. Este compuesto también inhibe de manera similar a PDK1 de fosforilar el sustrato peptídico PDKtide con una IC50 de ~10 nM. A una concentración de 0,1 μM–0,3 μM, induce una inhibición significativa dosis-dependiente de NDRG1 endógeno con una reducción de más del 50 % en la fosforilación en células HEK-293. Este químico (30 nM) induce una inhibición dosis-dependiente significativa de la fosforilación del bucle T de cada isoforma de SGK en células HEK-293. A 1 μM, inhibe la fosforilación del motivo hidrofóbico de S6K1 en una medida similar a la fosforilación del bucle T en células HEK-293. Este compuesto (3 μM) también suprime la actividad y la fosforilación de S6K1 inducidas por la estimulación con IGF1 de células HEK-293 privadas de suero. A 3 μM, inhibe marcadamente la fosforilación de varios sustratos de Akt [FoxO (forkhead box O), GSK3 y PRAS40]. Este químico (3 μM) también induce una inhibición casi máxima de la actividad y fosforilación de Akt1 en 5 minutos, y la fosforilación del sustrato de Akt (FoxO, GSK3 y PRAS40) se inhibe en un punto de tiempo ligeramente posterior (10 minutos). A 0,3 μM, inhibe significativamente la fosforilación de Akt o PRAS40/GSK3 en células ES knock-in PDK1K^465E/K465E pero no en células ES de tipo salvaje. Este compuesto (1 μM) suprime eficazmente la actividad de SGK1, según lo juzgado por la inhibición de la fosforilación de NDRG1 en células de glioblastoma U87. A 1 μM, también suprime potentemente la activación de S6K1 (Figura 7B) así como de SGK1 en células MEF (fibroblasto embrionario de ratón). Este químico (0,1 μM) induce una inhibición de aproximadamente el 50 % de la actividad de RSK2 en células HEK-293. [1]

A 30 μM, suprime la fuerza sensibilizada a Ca²⁺ inducida por U46619 en SM de arteria pulmonar de conejo permeabilizada con α-toxina. Este compuesto (30 μM) provoca una disminución significativa de la fuerza contráctil en respuesta a [Ca²⁺]. [2]

A 1 μM, provoca la abolición total del aumento intracelular de calcio inducido por EGF y la acumulación de fosfatos de inositol en células MDA-MB-231. Este químico (1 μM) inhibe la fosforilación de PLCγ1 Tyr783 en células MDA-MB-231. [3]

Este compuesto es un inhibidor altamente específico y potente de PDK1.

• Ensayos de actividad de quinasa

  Akt, S6K y RSK endógenos se inmunoprecipitan de 0,1 mg a 1 mg de lisado celular durante 2 horas a 4 °C en una plataforma vibratoria utilizando 3 μg–5 μg de los anticuerpos indicados. Para los ensayos de actividad de SGK, se incuban 150 μg de lisado transfectado con 5 μg de glutatión-Sepharose durante 3 horas a 4 °C. Los inmunoprecipitados se lavan dos veces con tampón de lisis que contiene 0,5 mM de NaCl, seguido de dos lavados con tampón de quinasa. Las reacciones de quinasa se inician con una mezcla de reacción para llevar las concentraciones finales de los componentes de la reacción a 0,1 mM de [γ-³²P]ATP (~200 c.p.m./pmol), 5 mM de acetato de magnesio, 0,1 % de 2-mercaptoetanol y 30 mM de péptido Crosstide (GRPRTSSFAEGKK). Las reacciones se llevan a cabo durante 20 minutos a 30 °C en una plataforma vibratoria y se detienen al depositar las reacciones en papel de fosfocelulosa P81. El recuento de Cerenkov se realiza después de lavar los papeles en ácido fosfórico, enjuagar en acetona y secar al aire. Una unidad de actividad se define como aquella que catalizó la incorporación de 1 nmol de [³²P]fosfato en el sustrato durante 1 hora.

• Líneas celulares

  MDA-MB-231 cells

• Concentraciones

  1 µM

• Tiempo de incubación

  30 minutes

• Método

  Cells were incubated with 1 µM of GSK2334470 for 30 minutes. Cells treated with DMSO were used as control.

• Modelos animales

  Nude mice

• Dosificaciones

  100 mg/kg

• Administración

  i.p.