GNF-5

GNF-5, cuando se usa en combinación, suprime la aparición de mutaciones de resistencia in vitro y muestra una actividad inhibidora aditiva en ensayos bioquímicos y celulares contra el mutante Bcr-Abl T315I. [1] Este compuesto muestra una potente actividad antiproliferativa con una EC50 de 430 nM y 580 nM contra células transformadas por Bcr-Abl de tipo salvaje y Bcr-Abl mutante E255K, respectivamente. [2]

GNF-5 (100 mg/kg) muestra eficacia en la proliferación dependiente de Bcr-Abl de tipo salvaje y T315I en modelos de xenoinjerto y trasplante de médula ósea. Además, una combinación de este compuesto (75 mg/kg) da como resultado una mejor supervivencia general en un modelo BMT de Bcr-Abl T315I. [1]

• Caracterización cinética de la inhibición de Abl

  El sistema de ensayo acoplado ATP/NADH en formato de 96 pocillos se utiliza para determinar la velocidad inicial de la fosforilación de péptidos catalizada por la tirosina quinasa Abl. La mezcla de reacción contenía 20 mM Tris-HCl, (pH 8,0), 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 2 mM PEP [ácido 2-(fosfonoooxi)-2-propenoico] y 20 μg de sustrato peptídico de Abl (EAIYAAPFAKKK), una concentración fija o variable (para determinar los parámetros cinéticos del inhibidor) de este compuesto aplicado, 1/50 del volumen final de la mezcla de reacción de la enzima PK/LDH (enzimas piruvato quinasa/lactato deshidrogenasa de músculo de conejo), 160 μM de NADH, 0,16 μM de Abl y ATP añadido al final para iniciar la reacción. Los datos de absorbancia se recogen cada 20 s a 340 nm utilizando un lector de microplacas SpectraMax M5.

• Líneas celulares

  Ba/F3.p210 cells

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Ba/F3.p210 cells are obtained by transfecting the IL-3-dependent murine hematopoietic Ba/F3 cell line with a pEYK vector containing p210BCR-ABL and Bcr-Abl mutations. All cell lines are cultured with 5% CO₂ at 37 °C in RPMI 1640 with 10% fetal bovine serum (FBS) and supplemented with 1% l-glutamine. Parental Ba/F3 cells are similarly cultured with 10% WEHI-conditioned medium as a source of IL-3. Transfected cell lines are cultured in media supplemented with 25 μg/mL zeocin. The 48 h cell proliferation studies are obtained using the CellTiter-Glo assay.

• Modelos animales

  Ba/F3.p210 xenograft mouse model

• Dosificaciones

  ~100 mg/kg bid

• Administración

  p.o.