GNF-2

N.º de catálogoS2899 Lote:S289902

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Datos técnicos

Fórmula

C₁₈H₁₃F₃N₄O₂

Peso molecular

374.32

Número CAS

778270-11-4

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

74 mg/mL (197.69 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

GNF-2 es un inhibidor no competitivo de ATP altamente selectivo de Bcr-Abl, no muestra actividad frente a las células tumorales transformadas por Flt3-ITD, Tel-PDGFR, TPR-MET y Tel-JAK1.

Objetivos

Bcr-Abl (SUP-B15 cell line)	Bcr-Abl (K562 cell line)
268 nM	273 nM

In vitro

GNF-2 provoca una inhibición del crecimiento dependiente de la dosis en las líneas celulares Bcr-abl-positivas con valores de IC50 de 273 nM (K562) y 268 nM (SUP-B15). Este compuesto inhibe el crecimiento de las células Ba/F3.p210^E255V y Ba/F3.p185^Y253H con valores de IC50 de 268 nM y 194 nM respectivamente. Este químico (1 μM) induce la apoptosis de las células Ba/F3.p210, así como de las células Ba/F3.p210^E255V. Inhibe la fosforilación de tirosina celular de Bcr-abl de manera dependiente de la dosis con una IC50 de 267 nM. Este compuesto (1 μM) induce una disminución significativa en los niveles de fosfo-Stat5 en las células Ba/F3.p210. Se une al bolsillo de unión mirística de Bcr-abl. Este inhibidor inhibe la actividad quinasa de c-Abl no miristilado más potentemente que la de c-Abl miristilado al unirse al bolsillo de unión a miristato en el lóbulo C del dominio quinasa. Este agente (10 μM) requiere BCR y/o los dominios SH3 y/o SH2 de c-Abl para inhibir la proliferación celular dependiente de BCR-Abl. Este, pero no un análogo GNF-2 metilado, se une a c-Abl en extractos celulares derivados de fibroblastos 3T3. Este compuesto (10 μM), de manera dependiente de la dosis, inhibe claramente la fosforilación de tirosina de CrkII. Inhibe la fosforilación de CrkII en células que expresan c-AblG2A con una IC50 de 0.051 μM. Este químico se une en una conformación extendida en el bolsillo de miristato con el grupo CF3 enterrado a la misma profundidad que los dos carbonos finales del ligando de miristato. Este compuesto (10 µM) combinado con imatinib (1 µM) reduce el número de clones resistentes a 1 µM de imatinib en al menos un 90 %. Inhibe la autofosforilación y proliferación de células BafF3 que expresan mutantes p210Bcr-Abl y p210Bcr-Abl. Este agente (8 nM) en combinación con GNF-5 (20 nM) produce efectos aditivos con respecto a la inhibición de la actividad quinasa de Abl64-515.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[2]}	Ensayo de unión Las proteínas recombinantes (100 nM para cada construcción) o las proteínas inmunoprecipitadas se diluyen en tampón de quinasa (20 mM HEPES (pH 7.4), 50 mM KCl, 0.1% CHAPS, 30 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM DTT y 1% de glicerol). Alícuotas de las proteínas diluidas se preincuban con DMSO o este compuesto durante 30 min a temperatura ambiente y luego se añaden a las placas de reacción K-LISA PTK EAY. La reacción de la quinasa se inicia añadiendo 0.1 mM de ATP y se deja proceder durante 30 min a temperatura ambiente. La fosforilación de GST-Abltide se monitoriza mediante SDS-PAGE y análisis de fosforimágenes o autorradiografía.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares Ba/F3.p210, Ba/F3.p210^E255V and Ba/F3.p185^Y253H cells Concentraciones ~10 μM Tiempo de incubación 48 hours Método Cells (0.3-0.6 × 10⁶ per mL) are plated in duplicate or triplicate in 96-well plates containing increasing GNF-2 concentrations (5 nM–10 μM). After incubation at 37 ℃ in 5% CO₂ for 48 hours, the effect of this compound on cell viability is determined by the MTT colorimetric dye reduction method. Inhibition of cell proliferation is calculated as a percentage of growth of DMSO-treated cells, and IC50 values are determined with Microsoft Excel XLfit3.

Ensayo de quinasa:^{^[2]}

Ensayo de unión
Las proteínas recombinantes (100 nM para cada construcción) o las proteínas inmunoprecipitadas se diluyen en tampón de quinasa (20 mM HEPES (pH 7.4), 50 mM KCl, 0.1% CHAPS, 30 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM DTT y 1% de glicerol). Alícuotas de las proteínas diluidas se preincuban con DMSO o este compuesto durante 30 min a temperatura ambiente y luego se añaden a las placas de reacción K-LISA PTK EAY. La reacción de la quinasa se inicia añadiendo 0.1 mM de ATP y se deja proceder durante 30 min a temperatura ambiente. La fosforilación de GST-Abltide se monitoriza mediante SDS-PAGE y análisis de fosforimágenes o autorradiografía.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
Ba/F3.p210, Ba/F3.p210^E255V and Ba/F3.p185^Y253H cells
Concentraciones
~10 μM
Tiempo de incubación
48 hours
Método
Cells (0.3-0.6 × 10⁶ per mL) are plated in duplicate or triplicate in 96-well plates containing increasing GNF-2 concentrations (5 nM–10 μM). After incubation at 37 ℃ in 5% CO₂ for 48 hours, the effect of this compound on cell viability is determined by the MTT colorimetric dye reduction method. Inhibition of cell proliferation is calculated as a percentage of growth of DMSO-treated cells, and IC50 values are determined with Microsoft Excel XLfit3.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16415863/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19679652/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20072125/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20152788/

Expandir

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , Oncotarget, 2017, 8(24):38717-38730 ]

Sellecks GNF-2 Ha sido citado por 8 Publicaciones

A multiplexed siRNA screen identifies key kinase signaling networks of brain glia [ Life Sci Alliance, 2023, 6(5)e202201605]	PubMed: 36878638
Imatinib protects against human beta-cell death via inhibition of mitochondrial respiration and activation of AMPK [ Clin Sci (Lond), 2021, 135(19):2243-2263]	PubMed: 34569605
Quantitative, Wide-Spectrum Kinase Profiling in Live Cells for Assessing the Effect of Cellular ATP on Target Engagement [Vasta JD Cell Chem Biol, 2018, 25(2):206-214]	PubMed: 29174542
Abl and Arg mediate cysteine cathepsin secretion to facilitate melanoma invasion and metastasis [ Sci Signal, 2018, 11(518)eaao0422]	PubMed: 29463776
Coronavirus S protein-induced fusion is blocked prior to hemifusion by Abl kinase inhibitors. [ J Gen Virol, 2018, 99(5):619-630]	PubMed: 29557770
Comparative Characterization of Osteoclasts Derived From Murine Bone Marrow Macrophages and RAW 264.7 Cells Using Quantitative Proteomics. [ JBMR Plus, 2018, 2(6):328-340]	PubMed: 30460336
Abl kinase regulation by BRAF/ERK and cooperation with Akt in melanoma. [ Oncogene, 2017, 36(32):4585-4596]	PubMed: 28368422
Contributions of MET activation to BCR-ABL1 tyrosine kinase inhibitor resistance in chronic myeloid leukemia cells. [Tsubaki M, et al. Oncotarget, 2017, 8(24):38717-38730]	PubMed: 28418880

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