Fostamatinib disodium hexahydrate

R788 es un profármaco del inhibidor de la tirosina quinasa del bazo (Syk) R406. R788 es un inhibidor competitivo para la unión de ATP con un Ki de 30 nM. R788 inhibe la degranulación de CHMC mediada por anti-IgE de forma dosis-dependiente con una EC50 de 56 nM. R788 también inhibe la producción y liberación de LTC4 y citoquinas y quimiocinas inducidas por anti-IgE, incluyendo TNFα, IL-8 y GM-CSF. La inhibición de Syk por R788 resulta en la inhibición de todos los eventos de fosforilación aguas abajo de la señalización de Syk. Además de la señalización de FcϵRI en CHMC, R788 inhibe más potentemente la señalización de los receptores de IL-4 e IL-2. R788 inhibe específicamente la señalización de FcγR en mastocitos, macrófagos y neutrófilos humanos. R788 puede inhibir el daño inflamatorio local mediado por complejos inmunes.[1] R788 induce la apoptosis de la mayoría de las líneas celulares de DLBCL examinadas. En las líneas celulares de DLBCL sensibles a R788, R788 inhibe específicamente la señalización de BCR tanto tónica como inducida por ligando (autofosforilación de SYK525/526 y fosforilación dependiente de SYK de la proteína de enlace de células B [BLNK]).[2]

La administración oral de R788 a ratones reduce la inflamación mediada por complejos inmunes en una reacción de Arthus pasiva inversa y dos modelos de artritis inducida por anticuerpos.[1] En otro estudio, R788 inhibe eficazmente la señalización de BCR in vivo, lo que resulta en una reducción de la proliferación y supervivencia de las células B malignas y prolonga significativamente la supervivencia de los animales tratados.[3] R788 demuestra una reducción significativa de los principales mediadores inflamatorios como TNFalpha, IL-1, IL-6 e IL-18, lo que conduce a una reducción de la inflamación y la degradación ósea en modelos de artritis reumatoide.[4]

• Ensayo de quinasa de polarización de fluorescencia y determinación de Ki

  Se realizan las reacciones de polarización de fluorescencia. Para la determinación de K_i, se preparan reacciones duplicadas de 200 μL a ocho concentraciones diferentes de ATP a partir de 200 μM (diluciones en serie de 2 veces) en presencia de DMSO o R788 a 125, 62,5, 31,25, 15,5 o 7,8 nM. En diferentes puntos de tiempo, se retiran 20 μL de cada reacción y se inactivan para detener la reacción. Para cada concentración de R788, se determina la velocidad de reacción a cada concentración de ATP y se grafica contra la concentración de ATP para determinar la K_m y V_max aparentes. Finalmente, la K_m aparente (o K_i aparente/V_max) se grafica contra la concentración del inhibidor para determinar la K_i.

• Líneas celulares

  Cultured human mast cells (CHMC)

• Concentraciones

  0-100 μM

• Tiempo de incubación

  0.5 h

• Método

  Cultured human mast cells (CHMC) are derived from cord blood CD34⁺ progenitor cells and grown, primed, and stimulated and shown in supplemental data. Before stimulation, cells are incubated with R788 or DMSO for 30 minutes. Cells are then stimulated with either 0.25 to 2 mg/mL anti-IgE or anti-IgG or 2 μM ionomycin. For tryptase measurement, ~1500 cells per well are stimulated for 30 min in modified Tyrode's buffer. For LTC4 and cytokine production, 100,000 cells per well are stimulated for 1 or 7 hours, respectively. Tryptase activity is measured by luminescence readout of a peptide substrate, and LTC4 and cytokines are measured using Luminex multiplex technology.

• Modelos animales

  Balb/c mice with arthritis

• Dosificaciones

  1 mg/kg or 5 mg/kg

• Administración

  o.g.