Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC)

N.º de catálogoS6928 Lote:S692801

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₁H₁₁NO₅S

Peso molecular

389.38

Número CAS

3326-32-7

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

78 mg/mL (200.31 mM)

Ethanol

10 mg/mL (25.68 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción	Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC, Fluorescein isothiocyanate isomer I, 5-FITC) es una sonda fluorescente capaz de conjugarse a tejidos y proteínas.
In vitro	1.Preparación de proteínas 1) Para obtener el mejor efecto de marcaje, prepare la concentración de proteína (anticuerpo) a 2 mg/mL. 2) El valor de pH de la solución proteica debe ser de 8,5 ± 0,5. Si el pH es inferior a 8,0, se debe usar bicarbonato de sodio 1M para el ajuste. 3) Si la concentración de proteína es inferior a 2 mg/ml, la eficiencia de marcaje se reducirá en gran medida. Para obtener la mejor eficiencia de marcaje, se recomienda que el rango de concentración final de proteína sea de 2-10 mg/mL. 4) La proteína debe estar en el tampón sin aminas primarias (como Tris o glicina) e iones de amonio, de lo contrario la eficiencia de marcaje se verá afectada. 2.Preparación del colorante Agregue DMSO anhidro al vial de Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC) para preparar una solución madre de 10 mM. Mezcle bien pipeteando o con vórtex. 3.Cálculo de la dosificación del colorante La cantidad de este compuesto requerida para la reacción depende de la cantidad de proteína a marcar, y la relación molar óptima de este con la proteína es de aproximadamente 10. Ejemplo: asumiendo que la proteína marcadora requerida es 1 mL 2 mg/mL IgG (MW=150.000), use 1 mL de DMSO para disolver 1 mg de FITC, el volumen requerido es 40 μL. 4.Ejecutar la reacción de conjugación 1) Un buen volumen de FITC recién preparado de 10 mg/mL se añade lentamente a 0,5 mL de muestra de proteína. En solución, agite suavemente para mezclar, luego centrifugue brevemente para recoger la muestra en el fondo del tubo de reacción. No mezcle demasiado para evitar la desnaturalización e inactivación de las muestras de proteína. 2) Los tubos de reacción se colocaron en un lugar oscuro y se incubaron suavemente a temperatura ambiente durante 60 minutos a intervalos. Durante 10-15 minutos, invierta suavemente los tubos de reacción varias veces para mezclar completamente los dos reactivos y aumentar la eficiencia de la barra. 5.Purificar la conjugación El siguiente protocolo es un ejemplo de purificación de conjugados colorante-proteína utilizando una columna de Sephadex G-25. 1) Prepare la columna de Sephadex G-25 según las instrucciones del fabricante. 2) Cargue la mezcla de reacción (de ""Ejecutar la reacción de conjugación"") en la parte superior de la columna de Sephadex G-25. 3) Agregue PBS (pH 7,2-7,4) tan pronto como la muestra corra justo por debajo de la superficie superior de la resina. 4) Agregue más PBS (pH 7,2-7,4) a la muestra deseada para completar la purificación en columna. Combine las fracciones que contienen el conjugado colorante-proteína deseado.

Descripción

Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC, Fluorescein isothiocyanate isomer I, 5-FITC) es una sonda fluorescente capaz de conjugarse a tejidos y proteínas.

In vitro

1.Preparación de proteínas
1) Para obtener el mejor efecto de marcaje, prepare la concentración de proteína (anticuerpo) a 2 mg/mL.
2) El valor de pH de la solución proteica debe ser de 8,5 ± 0,5. Si el pH es inferior a 8,0, se debe usar bicarbonato de sodio 1M para el ajuste.
3) Si la concentración de proteína es inferior a 2 mg/ml, la eficiencia de marcaje se reducirá en gran medida. Para obtener la mejor eficiencia de marcaje, se recomienda que el rango de concentración final de proteína sea de 2-10 mg/mL.
4) La proteína debe estar en el tampón sin aminas primarias (como Tris o glicina) e iones de amonio, de lo contrario la eficiencia de marcaje se verá afectada.
2.Preparación del colorante
Agregue DMSO anhidro al vial de Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC) para preparar una solución madre de 10 mM. Mezcle bien pipeteando o con vórtex.
3.Cálculo de la dosificación del colorante
La cantidad de este compuesto requerida para la reacción depende de la cantidad de proteína a marcar, y la relación molar óptima de este con la proteína es de aproximadamente 10.
Ejemplo: asumiendo que la proteína marcadora requerida es 1 mL 2 mg/mL IgG (MW=150.000), use 1 mL de DMSO para disolver 1 mg de FITC, el volumen requerido es 40 μL.
4.Ejecutar la reacción de conjugación
1) Un buen volumen de FITC recién preparado de 10 mg/mL se añade lentamente a 0,5 mL de muestra de proteína. En solución, agite suavemente para mezclar, luego centrifugue brevemente para recoger la muestra en el fondo del tubo de reacción. No mezcle demasiado para evitar la desnaturalización e inactivación de las muestras de proteína.
2) Los tubos de reacción se colocaron en un lugar oscuro y se incubaron suavemente a temperatura ambiente durante 60 minutos a intervalos. Durante 10-15 minutos, invierta suavemente los tubos de reacción varias veces para mezclar completamente los dos reactivos y aumentar la eficiencia de la barra.
5.Purificar la conjugación
El siguiente protocolo es un ejemplo de purificación de conjugados colorante-proteína utilizando una columna de Sephadex G-25.
1) Prepare la columna de Sephadex G-25 según las instrucciones del fabricante.
2) Cargue la mezcla de reacción (de ""Ejecutar la reacción de conjugación"") en la parte superior de la columna de Sephadex G-25.
3) Agregue PBS (pH 7,2-7,4) tan pronto como la muestra corra justo por debajo de la superficie superior de la resina.
4) Agregue más PBS (pH 7,2-7,4) a la muestra deseada para completar la purificación en columna.
Combine las fracciones que contienen el conjugado colorante-proteína deseado.

Protocolo (de referencia)

Sellecks Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC) Ha sido citado por 1 Publicación

Circular RNA circ-MMP11 Contributes to Lapatinib Resistance of Breast Cancer Cells by Regulating the miR-153-3p/ANLN Axis [ Front Oncol, 2021, 11:639961]	PubMed: 34295807

Circular RNA circ-MMP11 Contributes to Lapatinib Resistance of Breast Cancer Cells by Regulating the miR-153-3p/ANLN Axis [ Front Oncol, 2021, 11:639961]

PubMed: 34295807

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