Erlotinib (CP-358774)

Erlotinib HCl inhibe potentemente la activación de EGFR en células intactas, incluyendo células tumorales humanas de cabeza y cuello HNS (IC50 20nM), células de cáncer de colon humano DiFi y células de cáncer de mama humano MDA MB-468. Este compuesto (1 μM) induce apoptosis en células de cáncer de colon humano DiFi. [1] Inhibe el crecimiento de un panel de líneas celulares de CPNM, incluyendo A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 con IC50 que van desde 29 nM hasta >20 μM. [2] Este químico (2 μM) inhibe significativamente el crecimiento de células pancreáticas AsPC-1 y BxPC-3. [3] Los efectos de este compuesto en combinación con gemcitabina se consideran aditivos en células de cáncer de páncreas con mutación KRAS. Diez micromolar de este químico inhibe la fosforilación de EGFR en los sitios Y845 (fosforilación dependiente de Src) y Y1068 (autofosforilación). [4] La combinación con este compuesto podría modular negativamente la actividad de Akt estimulada por rapamicina y producir un efecto sinérgico en la inhibición del crecimiento celular. [5]

A dosis de 100 mg/kg, Erlotinib HCl previene completamente la autofosforilación de EGFR inducida por EGF en tumores HN5 humanos que crecen como xenoinjertos en ratones atímicos y del EGFR hepático de los ratones tratados. [1] Este compuesto (100 mg/Kg) inhibe los modelos tumorales H460a y A549 con una tasa de inhibición del 71 y 93%. [5]

• Ensayos de quinasa

  Las placas de 96 pocillos se recubren mediante incubación durante la noche a 37 °C con 100 μL por pocillo de 0,25 mg/mL de PGT en PBS. El exceso de PGT se elimina por aspiración, y la placa se lava 3 veces con tampón de lavado (0,1% Tween 20 en PBS). La reacción de la quinasa se realiza en 50 μL de 50 mM HEPES (pH 7,3), que contiene 125 mM de cloruro de sodio, 24 mM de cloruro de magnesio, 0,1 mM de ortovanadato de sodio, 20 μM de ATP, 1,6 μg/mL de EGF y 15 ng de EGFR, purificado por afinidad de membranas celulares A431. Erlotinib HCl en DMSO se añade para obtener una concentración final de DMSO del 2,5%. La fosforilación se inicia mediante la adición de ATP y se prosigue durante 8 minutos a temperatura ambiente, con agitación constante. La reacción de la quinasa se termina por aspiración de la mezcla de reacción y se lava 4 veces con tampón de lavado. El PGT fosforilado se mide mediante 25 minutos de incubación con 50 μL por pocillo de anticuerpo anti-fosfotirosina PY54 conjugado con HRP, diluido a 0,2 μg/mL en tampón de bloqueo (3% BSA y 0,05% Tween 20 en PBS). El anticuerpo se retira por aspiración, y la placa se lava 4 veces con tampón de lavado. La señal colorimétrica se desarrolla mediante la adición de sustrato de peroxidasa de micropocillos TMB, 50 μL por pocillo, y se detiene mediante la adición de ácido sulfúrico 0,09 M, 50 μL por pocillo. La fosfotirosina se estima mediante la medición de la absorbancia a 450 nm. La señal para los controles es típicamente de 0,6-1,2 unidades de absorbancia, con esencialmente ningún fondo en pocillos sin AlP, EGFR o PGT y es proporcional al tiempo de incubación durante 10 minutos.

• Líneas celulares

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Concentraciones

  30 nM-20 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Modelos animales

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Dosificaciones

  50 mg/kg

• Administración

  Oral administration