EPZ005687

EPZ005687 muestra una inhibición de la actividad enzimática de PRC2 dependiente de la concentración con un valor de IC50 de 54 nM. Es un inhibidor directo de la actividad enzimática de PRC2 y no funciona interrumpiendo las interacciones proteína-proteína entre las subunidades de PRC2. Este compuesto se une en el bolsillo SAM del dominio SET de EZH2 y es un inhibidor SAM-competitivo de la actividad enzimática de EZH2. La afinidad de este químico es similar (dentro de un rango de dos veces) para los complejos PRC2 que contienen EZH2 de tipo salvaje y mutante Tyr641, pero una afinidad significativamente mayor para la enzima mutante A677G (5,4 veces). Reduce la metilación de H3K27 en varias células de linfoma. Muestra una potente muerte celular en células mutantes heterocigotas Tyr641 o Ala677, con efectos mínimos sobre la proliferación de células de tipo salvaje. Este compuesto aumenta la fase G1 del ciclo celular con disminuciones correlativas en las fases S y G2/M. En una línea celular de linfoma mutante Tyr641, puede conducir a la desrepresión de genes diana conocidos de EZH2 y afectar a genes específicamente reprimidos por el mutante EZH2 Tyr641. [1]

EPZ005687, un inhibidor selectivo de la metiltransferasa EZH2, inhibe significativamente el desarrollo de la HAP inducida por TAC de manera dependiente de EZH2-SOD1-ROS.

• Ensayos enzimáticos bioquímicos

  El compuesto se incuba durante 30 min con 40 μL por pocillo de 5 nM de PRC2 (la concentración final del ensayo en 50 μL es de 4 nM) en tampón de ensayo 1X (20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% gelatina de piel bovina y 0.5 mM DTT). Se añaden 10 μL por pocillo de mezcla de sustrato que comprende tampón de ensayo ³ H-SAM, SAM no marcado y un péptido que representa los residuos 21-44 de la histona H3 que contienen biotina C-terminal (unida a una lisina con terminación amida C-terminal) para iniciar la reacción (ambos sustratos están presentes en la mezcla de reacción final en sus respectivos valores de Km, un formato de ensayo denominado «condiciones equilibradas»). Las concentraciones finales de los sustratos y el estado de metilación del péptido sustrato se indican para cada enzima. Las reacciones se incuban durante 90 min a temperatura ambiente y se detienen con 10 μL por pocillo de 600 μM de SAM no marcado, luego se transfieren a una flashplate de 384 pocillos y se lavan después de 30 min.

• Líneas celulares

  OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  11 days

• Método

  Plating densities are determined for each cell line on the basis of linear log-phase growth. Cells are counted and split back to the original plating density in fresh medium with EPZ005687 on days 4 and 7.

• Modelos animales

  Balb/c mice

• Dosificaciones

  10 mg/kg

• Administración

  i.p.