GSK1349572 (Dolutegravir)

Dolutegravir (GSK1349572) muestra un potente efecto inhibidor sobre nueve aislados clínicos de pacientes infectados por el VIH-2 naïve a los inhibidores de integrasa con EC50 que oscila entre 0,2 nM y 1,4 nM.[1]

In vitro, inhibe la transferencia de cadena catalizada por la integrasa recombinante del VIH-1 con una IC50 de 2,7 nM. Además, este compuesto inhibe potentemente la replicación del VIH en células como las células mononucleares de sangre periférica (PBMC), las células MT-4 y las células CIP4 infectadas con un vector lentiviral PHIV autoinactivante, con valores de EC50 de 0,51 nM, 0,71 nM y 2,2 nM, respectivamente.[2]

In vitro, también exhibe una potente actividad contra cinco virus diferentes resistentes a los inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleósidos o a los inhibidores de la transcriptasa inversa nucleósidos, con EC50 que oscila entre 1,3 nM y 2,1 nM. De manera similar a su actividad contra el virus de tipo salvaje, muestra una eficacia equivalente contra dos virus resistentes a los inhibidores de la proteasa, con valores de EC50 de 0,36 nM y 0,37 nM, respectivamente.[2]

Dolutegravir (GSK1349572), un fármaco antirretroviral (ARV) de primera línea utilizado en la terapia combinada para el VIH-1, inhibe la actividad de las MMP y tiene el potencial de afectar el neurodesarrollo prenatal y postnatal.

• Ensayo de transferencia de cadena in vitro

  Las potencias inhibidoras de Dolutegravir (GSK1349572) y otros INIs se miden en un ensayo de transferencia de cadena utilizando integrasa de VIH recombinante. Se forma un complejo de integrasa y perlas de ensayo de proximidad por centelleo (SPA) recubiertas de estreptavidina-ADN donante preprocesado biotinilado incubando 2 μM de integrasa recombinante purificada con 0,66 μM de perlas SPA recubiertas de estreptavidina-ADN donante biotinilado de 4 mg/mL en 25 mM de ácido morfolinopropanosulfónico de sodio (MOPS) (pH 7,2), 23 mM de NaCl y 10 mM de MgCl₂ durante 5 minutos a 37 °C. Estas perlas se centrifugan y se preincuban con INIs diluidos durante 60 minutos a 37 °C. Luego se añade un sustrato de ADN diana marcado con ₃H para dar una concentración final de 7 nM de sustrato, y la mezcla de reacción de transferencia de cadena se incuba a 37 °C durante 25 a 45 minutos, lo que permite un aumento lineal en la transferencia de cadena del ADN donante al ADN diana radiomarcado. La señal se lee utilizando un lector de placas de centelleo Wallac MicroBeta.

• Líneas celulares

  MT-4

• Concentraciones

  0 to 10 μM

• Tiempo de incubación

  4 days or 5 days

• Método

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Modelos animales

  C3H/HeJ mice

• Dosificaciones

  50 mg/kg

• Administración

  o.g.