Dinaciclib (SCH 727965)

Dinaciclib también es un potente inhibidor de la replicación del ADN que bloquea la incorporación de timidina (dThd) en el ADN en células A2780 con una IC50 de 4 nM. Este compuesto suprime fuertemente la fosforilación de Rb en Ser 807/811 a concentraciones >6,25 nM, lo que concuerda con la observación de que se requieren concentraciones de 4 nM para una inhibición del 50 % de la incorporación de dThd en el ADN en el mismo modelo celular. Significativamente, la supresión completa de la fosforilación de Rb se correlaciona con el inicio de la apoptosis, como lo indica la aparición del producto de escisión de PARP p85 en células expuestas a >6,25 nM de este químico. Es activo contra un amplio espectro de líneas celulares tumorales humanas. [1] La adición de este compuesto durante la exposición también suprime la acumulación de γ-H2AX, de manera dependiente de la dosis. [2] Inhibe la proliferación de células de melanoma y las induce a una apoptosis masiva. [3] Este químico induce la apoptosis de varias líneas celulares de osteosarcoma, incluidas las resistentes a la doxorrubicina. Atenúa la fosforilación de RNAP II en serina 2 y la fosforilación del inhibidor de CDK p27^Kip1 en treonina 187. Las reducciones en la actividad de fosforilación ocurren a 12 - 40 nM de este compuesto (4 a 16 horas después de la adición). También reduce la fosforilación de Rb en serina 807/811. Este químico induce la apoptosis de células U2OS agotadas de mock y p53 en una extensión similar. [4]

La administración i.p. de Dinaciclib a 8, 16, 32 y 48 mg/kg diarios durante 10 días da como resultado una inhibición tumoral del 70%, 70%, 89% y 96%, respectivamente. La MED (dosis efectiva mínima) de este compuesto parece ser <8 mg/kg. Es bien tolerado, y la pérdida máxima de peso corporal en el grupo de dosis más alta es del 5%. Este químico tiene actividad antitumoral dosis-dependiente in vivo, y una inhibición casi completa del crecimiento tumoral ocurre a un nivel de dosis por debajo de la MTD (dosis máxima tolerada). Tiene una vida media plasmática corta en ratones. [1]

• Ensayo de quinasa de ciclina/CDK

  Las holoenzimas de ciclina/CDK recombinantes se purifican a partir de células Sf9 diseñadas para producir baculovirus que expresan una ciclina o CDK específica. Los complejos de ciclina/CDK se diluyen típicamente a una concentración final de 50 μg/mL en un tampón de reacción de quinasa que contiene 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT y 0,1 mM ortovanadato de sodio. Para cada reacción de quinasa, se mezclan 1 μg de enzima y 20 μL de una solución de sustrato de 2 μM (un péptido biotinilado derivado de la histona H1) y se combinan con 10 μL de este compuesto diluido. La reacción se inicia con la adición de 50 μL de 2 μM ATP y 0,1 μCi de ³³P-ATP. Las reacciones de quinasa se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente y se detienen con la adición de 0,1% de Triton X-100, 1 mM de ATP, 5 mM de EDTA y 5 mg/mL de perlas SPA recubiertas de estreptavidina. Las perlas SPA se capturan usando una placa de filtro GF/B de 96 pocillos y un recolector universal Filtermate. Las perlas se lavan dos veces con 2 M NaCl y dos veces con 2 M NaCl que contiene 1% de ácido fosfórico. La señal se analiza luego usando un contador de centelleo líquido TopCount de 96 pocillos.

• Líneas celulares

  A2780 cells

• Concentraciones

  0 μM -5 μM

• Tiempo de incubación

  24 hours

• Método

  A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 10³ cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% ¹⁴C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various this compound dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCoun^TM.

• Modelos animales

  Nude mice bearing A2780 tumors

• Dosificaciones

  8 mg/kg, 16 mg/kg, 32 mg/kg, and 48 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p.