Derazantinib

ARQ-087 tiene actividad antiproliferativa en líneas celulares impulsadas por la desregulación de FGFR, incluyendo amplificaciones, fusiones y mutaciones. Los estudios del ciclo celular en líneas celulares con altos niveles de proteína FGFR2 muestran una relación positiva entre el arresto del ciclo celular en G1 inducido por ARQ 087 y la inducción posterior de apoptosis. ARQ 087 inhibe la autofosforilación de FGFR1 y FGFR2 de manera dosis-dependiente. En células Cos-1 que sobreexpresan FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 de longitud completa, ARQ 087 inhibe su fosforilación con valores de EC50 de < 0,123 μM, 0,185 μM, 0,463 μM, >10 μM respectivamente. ARQ 087 inhibe la quinasa FGFR mediante un mecanismo competitivo de ATP, y es capaz de inhibir tanto las formas inactivas como las completamente activas de la quinasa FGFR. Por lo tanto, ARQ 087 retrasa la activación de FGFR al inhibir su autofosforilación, así como la inhibición de la quinasa activa fosforilada[1].

ARQ 087 atenúa la señalización de FGFR en tumores de xenoinjerto humano SNU-16, lo que lleva a una reducción de phospho-FGFR, phospho-FRS2-α y phospho-ERK, mientras que la proteína FGFR2 total no se ve afectada. ARQ 087 es eficaz para inhibir el crecimiento tumoral in vivo en modelos de tumores de xenoinjerto SNU-16 y NCI-H716 alterados por FGFR2, con amplificaciones y fusiones genéticas. ARQ 087 demostró eficacia en múltiples modelos de xenoinjerto in vivo y fue bien tolerado en dosis de hasta 75 mg/kg[1].

• Determinación de Ki y modo de inhibición

  La actividad inhibidora de la quinasa de ARQ 087 se determinó para las proteínas recombinantes FGFR1 o FGFR2 utilizando un sustrato peptídico de PYK2 biotinilado y ATP. ARQ 087 se tituló en DMSO utilizando un esquema de dilución de 3 veces, y luego se diluyó 10 veces más en agua desionizada para una concentración final de DMSO del 10%. Se añadió un volumen (2,5 μL) de estas diluciones o vehículo a cada pozo de una placa de reacción. Se añadió FGFR1 o FGFR2 al tampón de ensayo (50 mM Tris, pH 8,0, 0,02 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10% glicerol, 0,1 mM Na3PO4, 1 mM DTT) a cada pozo en un volumen de 17,5 μL para una concentración final de 0,50 o 0,25 nM, respectivamente. Después de un período de preincubación de 30 minutos, se añadieron ATP y sustrato en tampón de ensayo (5 μL) para concentraciones finales de 0–1,000 μM ATP y 80 nM de PYK2 biotinilado, para un volumen de reacción final de 25 μL. Las placas se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente, y luego se detuvieron en la oscuridad mediante la adición de 10 μL de mezcla de parada/detección preparada en tampón de ensayo que contenía EDTA, donador de estreptavidina AlphaScreen™ y perlas aceptoras P-TYR-100 para concentraciones finales de 10 mM de EDTA y 500 ng/pozo de perlas donadoras y aceptoras AlphaScreen™. Las placas de ensayo se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad, y las placas se leyeron en un lector de placas multietiqueta Perkin Elmer, Envision. (longitud de onda de excitación: 640 nm, longitud de onda de emisión: 570 nm). El efecto de la concentración de la enzima se aplicó para inhibidores de unión estrecha, y si fue necesario, los valores de IC50 se convirtieron en valores de Ki si la concentración de la enzima estaba por encima de los valores de IC50 bajo las condiciones de ensayo utilizadas.

• Líneas celulares

  NCI-H716 and SNU-16 cells

• Concentraciones

  0.1 μM or 1 μM

• Tiempo de incubación

  24 or 72 hours

• Método

  Cells are plated and incubated at 37°C overnight and subsequently treated with 0.1 μM or 1 μM of ARQ 087 for 24 or 72 hours. The cells were fixed and stained with Cycletest Plus Reagent kit and cell cycle profiles were analyzed using a FACS Calibur flow cytometer.

• Modelos animales

  female NCr nu/nu mice (SNU-16) or CB17 SCID mice (NCI-H716)

• Dosificaciones

  0, 25, 50, and 75 mg/kg

• Administración

  oral administration