D 4476

N.º de catálogoS7642 Lote:S764201

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₃H₁₈N₄O₃

Peso molecular

398.41

Número CAS

301836-43-1

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

79 mg/mL (198.28 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

D 4476 es un potente, selectivo y permeable a las células inhibidor de CK1 (casein kinase 1) con una IC50 de 200 nM y 300 nM en un ensayo libre de células para CK1 de Schizosaccharomyces pombe y CK1δ, respectivamente. También actúa como un inhibidor de ALK5 con una IC50 de 500 nM.

Objetivos

CK1 from Schizosaccharomyces pombe	CK1δ	ALK5
200 nM	300 nM	500 nM

In vitro

D4476 (10 μM) inhibe eficazmente CK1 y ALK5 con actividades de aproximadamente 7% y 22% frente al grupo de control, respectivamente. En células de hepatoma H4IIE, D4476 inhibe específicamente la fosforilación del factor de transcripción endógeno forkhead box O1a (FOXO1a) en Ser322 y Ser325, sin afectar la fosforilación de otros sitios. D4476 induce citotoxicidad en las líneas ANBL6, INA6 y RPMI8226; las líneas MM1S y U266 son menos sensibles; y la línea OPM1 es totalmente resistente. Altas concentraciones (50 μM) de D4476 indujeron toxicidad en todas las líneas de mieloma múltiple (MM). En células MM, D4476 aumenta los niveles de proteínas de TP53, P27 y FADD, así como la progresión del ciclo celular y la inducción de apoptosis. El tratamiento de células madre leucémicas (CML) con D4476 muestra una destrucción altamente selectiva de CML sobre HSPCs normales.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[4]}	CK1 kinase assay Todos los ensayos de proteín quinasa (25 μL) se llevan a cabo a temperatura ambiente (21℃). Los ensayos se realizan durante 40 min utilizando una estación de trabajo de automatización de laboratorio Biomek 2000 en un formato de 96 pocillos. Las concentraciones de acetato de magnesio y [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) en los ensayos son de 10 mM y 0,1 mM, respectivamente. Los ensayos se inician con MgATP y se detienen con la adición de 5 μL de ácido ortofosfórico 0,5 M. Las alícuotas se depositan en filtros P30, se lavan cuatro veces en ácido fosfórico 75 mM para eliminar el ATP, una vez en metanol, luego se secan y se cuenta la radioactividad. La CK1 δ (5-20 m-unidades), diluida en 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1% (v/v) Tritón X-100, 5 mM ditiotreitol, 50% (v/v) glicerol, se ensaya contra el péptido RRKDLHDDEEDEAMSITA en una incubación que contiene 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% (v/v) Tritón X-100 y 0,5 mM de péptido sustrato.
Ensayo celular:^{^[2]}	Líneas celulares MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells Concentraciones 50 μM Tiempo de incubación 72 h Método MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Ensayo de quinasa:^{^[4]}

CK1 kinase assay
Todos los ensayos de proteín quinasa (25 μL) se llevan a cabo a temperatura ambiente (21℃). Los ensayos se realizan durante 40 min utilizando una estación de trabajo de automatización de laboratorio Biomek 2000 en un formato de 96 pocillos. Las concentraciones de acetato de magnesio y [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) en los ensayos son de 10 mM y 0,1 mM, respectivamente. Los ensayos se inician con MgATP y se detienen con la adición de 5 μL de ácido ortofosfórico 0,5 M. Las alícuotas se depositan en filtros P30, se lavan cuatro veces en ácido fosfórico 75 mM para eliminar el ATP, una vez en metanol, luego se secan y se cuenta la radioactividad. La CK1 δ (5-20 m-unidades), diluida en 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1% (v/v) Tritón X-100, 5 mM ditiotreitol, 50% (v/v) glicerol, se ensaya contra el péptido RRKDLHDDEEDEAMSITA en una incubación que contiene 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% (v/v) Tritón X-100 y 0,5 mM de péptido sustrato.

Ensayo celular:^{^[2]}

Líneas celulares
MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells
Concentraciones
50 μM
Tiempo de incubación
72 h
Método
MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14710188/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24962017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24616378/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12534346/

Expandir

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , Mol Oncol, 2016, 10(5):677-92 ]

Sellecks D 4476 Ha sido citado por 22 Publicaciones

SCFβ-TrCP targets Ajuba for degradation in a GSK3β-dependent manner in colorectal cancer [ Neoplasia, 2025, 66:101175]	PubMed: 40367710
A kinome-wide CRISPR screen identifies CK1α as a target to overcome enzalutamide resistance of prostate cancer [ Cell Rep Med, 2023, 4(4):101015]	PubMed: 37075701
Golgi retention and oncogenic KIT signaling via PLCγ2-PKD2-PI4KIIIβ activation in gastrointestinal stromal tumor cells [ Cell Rep, 2023, 42(9):113035]	PubMed: 37616163
Neddylation inhibition induces glutamine uptake and metabolism by targeting CRL3SPOP E3 ligase in cancer cells [ Nat Commun, 2022, 13(1):3034]	PubMed: 35641493
CHMP2B regulates TDP-43 phosphorylation and cytotoxicity independent of autophagy via CK1 [ J Cell Biol, 2022, 221(1)e202103033]	PubMed: 34726688
CK1α upregulates the IFNAR1 expression to prompt the anti-HBV effect of type I IFN in hepatoma carcinoma cells [ Virol Sin, 2022, S1995-820X(22)00143-2]	PubMed: 35985475
SPOP and OTUD7A Control EWS-FLI1 Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ Adv Sci (Weinh), 2021, e2004846]	PubMed: 34060252
SPOPandOTUD7AControlEWS–FLI1Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ ADVANCED SCIENCE, 2021, 8(14)]	PubMed: None
CK1δ stimulates ubiquitination-dependent proteasomal degradation of ATF4 to promote chemoresistance in gastric Cancer [ Clin Transl Med, 2021, 11(10):e587]	PubMed: 34709767
SKI activates the Hippo pathway via LIMD1 to inhibit cardiac fibroblast activation [ Basic Res Cardiol, 2021, 116(1):25]	PubMed: 33847835

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