Silmitasertib (CX-4945)

Silmitasertib (CX-4945) es selectivo para CK2, ya que solo inhibe 7 de las 238 quinasas en más del 90% a una concentración de 0,5 μM, que es 500 veces mayor que el IC50 de CK2. Aunque en sistemas libres de células este compuesto inhibe FLT3, PIM1 y CDK1 con IC50 de 35 nM, 46 nM y 56 nM, respectivamente, el tratamiento a 10 μM es inactivo contra FLT3, PIM1 y CDK1 en ensayos funcionales basados en células. Exhibe un amplio espectro de actividad antiproliferativa, y las líneas celulares de cáncer de mama muestran el rango más amplio de sensibilidad a este con un EC50 de 1,71-20,01 μM. La actividad antiproliferativa de CX-4945 se correlaciona con los niveles de ARNm y proteínas de CK2α, pero no con la subunidad catalítica CK2α', la subunidad reguladora CK2β y el estado mutacional de PI3K/Akt o PTEN. Inhibe la señalización de PI3K/Akt bloqueando directamente la fosforilación de Akt en Serina 129 por CK2 en lugar de mediante la activación de PTEN. El tratamiento con este compuesto provoca una fosforilación reducida de p21 (T145), un aumento de los niveles totales de p21 y p27, y la inducción de la actividad de la caspasa 3/7. Induce una detención del ciclo celular G2/M en células BT-474 y una detención G1 en células BxPC-3. Este compuesto inhibe la proliferación, migración y formación de tubos de HUVEC con un IC50 de 5,5 μM, 2 μM y 4 μM, respectivamente. En condiciones hipóxicas en células BT-474 y BxPC-3, previene la regulación a la baja de p53 y pVHL y reduce la activación de la transcripción de HIF-1α. [1] Inhibe potentemente la actividad intracelular endógena de CK2 con un IC50 de 0,1 μM en células Jurkat. [2]

La administración oral de Silmitasertib (CX-4945) a 25 mg/kg o 75 mg/kg dos veces al día muestra una potente actividad antitumoral en el modelo BT-474, con un TGI del 88 % y 97 %, respectivamente, y 2 de 9 animales en cada grupo mostrando una reducción de más del 50 % en el tamaño del tumor en comparación con el volumen tumoral inicial. En el modelo BxPC-3, el tratamiento con este compuesto a 75 mg/kg dos veces al día muestra un TGI del 93 % con 3 animales sin evidencia de tumor restante al final del período de tratamiento. [1] En el modelo de xenoinjerto PC3, la administración del mismo a 25 mg/kg, 50 mg/kg o 75 mg/kg causa una inhibición del crecimiento tumoral con un TGI del 19 %, 40 % y 86 %, respectivamente. [2]

• Ensayo de CK2 Kinase

  Silmitasertib (CX-4945) se añade en un volumen de 10 μL a una mezcla de reacción que comprende 10 μL de tampón de dilución de ensayo (ADB; 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glicerofosfato, 5 mM EGTA, 1 mM ortovanadato de sodio y 1 mM ditiotreitol), 10 μL de péptido sustrato (RRRDDDSDDD, disuelto en ADB a una concentración de 1 mM), 10 μL de CK2 humana recombinante (ααββ-holoenzima, 25 ng disuelto en ADB). Las reacciones se inician con la adición de 10 μL de solución de ATP (90% 75 mM MgCl₂, 75 μM ATP (concentración final de ATP=15 μM) disuelto en ADB; 10% [γ-³³P]ATP (stock 1 mCi/100 μL; 3000 Ci/mM) y se mantienen durante 10 minutos a 30 °C. Las reacciones se detienen con 100 μL de ácido fosfórico al 0,75% y luego se transfieren y filtran a través de una placa de filtro de fosfocelulosa. Después de lavar cada pozo cinco veces con ácido fosfórico al 0,75%, la placa se seca al vacío durante 5 minutos y, después de la adición de 15 μL de líquido de centelleo a cada pozo, la radiactividad residual se mide utilizando un contador de luminiscencia Wallac. Los valores de IC50 para este compuesto se derivan de ocho concentraciones en un rango de 0,0001 μM a 1 μM.

• Líneas celulares

  SKBr3, MDA-MB-453, BT-474, ZR-75-1, MDA-MB-231, MDA-MB-468, T47D, MCF 7, Hs578T, MDA-MB-361, UACC-812, et al.

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Tiempo de incubación

  4 days

• Método

  Cells are seeded at a density of 3,000 cells per well 24 hours prior to treatment with Silmitasertib (CX-4945), in appropriate media, and then treated with various concentrations of this compound. Suspensions cells are seeded and treated on the same day. Following 4 days of incubation, Alamar Blue (20 μL, 10% of volume per well) is added and the cells are further incubated at 37 °C for 4-5 hours. Fluorescence with excitation wavelength at 530-560 nm and emission wavelength at 590 nm is measured.

• Modelos animales

  Female immunocompromised mice CrTac:Ncr-Foxn1nu injected with BxPC-3 or BT-474 cells

• Dosificaciones

  25 or 75 mg/kg

• Administración

  Oral gavage twice daily