CW069

N.º de catálogoS7336 Lote:S733601

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₃H₂₁IN₂O₃

Peso molecular

500.33

Número CAS

1594094-64-0

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

CW069 es un inhibidor alostérico y selectivo de la proteína motora de microtúbulos HSET con una IC50 de 75 μM, con una selectividad significativa sobre KSP.

Objetivos

HSET

75 μM

In vitro

CW069 aumenta los husos multipolares en células N1E-115 con centrosomas supernumerarios sin alterar la morfología del huso bipolar en células de fibroblastos dérmicos humanos normales. Este compuesto inhibe el crecimiento en células cancerosas N1E-115 con una IC50 de 10 μM, pero no en células NHDF o células primarias de médula ósea humana.

Características

Inhibidor alostérico selectivo de HSET.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayo enzimático de ATPasa in vitro El protocolo está optimizado para su uso con HSET y KSP de longitud completa, N-terminal, con etiqueta 6His, y mide la actividad estimulada por MT de las proteínas. La inhibición de la actividad de Gsp sintasa de HSET/KSP se observa espectrofotométricamente acoplando la hidrólisis de ATP a la oxidación de NADH a través de reacciones de piruvato quinasa/lactato deshidrogenasa. El ensayo se inicia añadiendo Gsp sintasa/amidasa purificada (12,8 nM) a una mezcla de ensayo que contiene los siguientes componentes (concentración final): 6 nM de proteína, 0,07 mg/ml de MT (University Biologicals), 1,56 mM de glutatión, 10 mM de espermidina, 2 mM de ATP, 2,7 mM de MgCl₂, 1 mM de fosfo(enol)-piruvato, 0,2 mM de NADH, 50 μg/ml de lactato deshidrogenasa, 100 μg/ml de piruvato quinasa y varias concentraciones de este compuesto, todo ello en 50 mM de Na PIPES (pH 6,8) a 37 °C. El ensayo de detección ADP-Glo (Promega) se realiza según las instrucciones del fabricante. Todas las adiciones de compuestos se realizaron utilizando un multidrop BioMek Nxp. Las placas se leyeron utilizando un lector de microplacas Pherastar.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. Concentraciones ~400 μM Tiempo de incubación 72 hours Método Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayo enzimático de ATPasa in vitro
El protocolo está optimizado para su uso con HSET y KSP de longitud completa, N-terminal, con etiqueta 6His, y mide la actividad estimulada por MT de las proteínas. La inhibición de la actividad de Gsp sintasa de HSET/KSP se observa espectrofotométricamente acoplando la hidrólisis de ATP a la oxidación de NADH a través de reacciones de piruvato quinasa/lactato deshidrogenasa. El ensayo se inicia añadiendo Gsp sintasa/amidasa purificada (12,8 nM) a una mezcla de ensayo que contiene los siguientes componentes (concentración final): 6 nM de proteína, 0,07 mg/ml de MT (University Biologicals), 1,56 mM de glutatión, 10 mM de espermidina, 2 mM de ATP, 2,7 mM de MgCl₂, 1 mM de fosfo(enol)-piruvato, 0,2 mM de NADH, 50 μg/ml de lactato deshidrogenasa, 100 μg/ml de piruvato quinasa y varias concentraciones de este compuesto, todo ello en 50 mM de Na PIPES (pH 6,8) a 37 °C. El ensayo de detección ADP-Glo (Promega) se realiza según las instrucciones del fabricante. Todas las adiciones de compuestos se realizaron utilizando un multidrop BioMek Nxp. Las placas se leyeron utilizando un lector de microplacas Pherastar.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
Concentraciones
~400 μM
Tiempo de incubación
72 hours
Método
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

Sellecks CW069 Ha sido citado por 8 Publicaciones

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

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Los productos Selleck se transportan a temperatura ambiente. Si recibe el producto a temperatura ambiente, tenga la seguridad de que el Departamento de Inspección de Calidad de Selleck ha realizado experimentos para verificar que la colocación a temperatura normal durante un mes no afectará la actividad biológica de los productos en polvo. Después de la recogida, guarde el producto de acuerdo con los requisitos descritos en la hoja de datos. La mayoría de los productos Selleck son estables en las condiciones recomendadas.

NO PARA USO HUMANO, DIAGNÓSTICO VETERINARIO O TERAPÉUTICO.