CPI-613 (Devimistat)

Devimistat (CPI-613) produce toxicidad selectiva in vitro contra varias líneas celulares tumorales, incluidas las células de cáncer de pulmón humano H460 y las células de sarcoma humano Saos-2, con valores de EC50 de 120 μM y 120 μM, respectivamente. Interrumpe el metabolismo mitocondrial de las células cancerosas H460, incluida la inhibición de la actividad del complejo PDH y la pérdida del potencial de membrana mitocondrial de manera dependiente del tiempo y la dosis del fármaco. Además, este compuesto (240 μM) también induce la muerte celular apoptótica y no apoptótica en las células de cáncer de pulmón humano H460 y las células de sarcoma humano Saos-2. [1]

Devimistat (CPI-613) tiene una potente actividad anticancerígena en un modelo de xenoinjerto tumoral humano de una célula tumoral pancreática (BxPC-3) a 25 mg/kg. De manera similar, este compuesto (10 mg/kg) también produce una inhibición significativa del crecimiento tumoral del carcinoma pulmonar no microcítico humano H460 en un modelo de ratón. Además, produce poca o ninguna toxicidad de efectos secundarios en los rangos de dosis terapéuticas esperados en modelos animales grandes y tiene una dosis máxima tolerada de 100 mg/kg en ratones. [1]

• Fosforilación de E1α

  Las células se siembran y se cultivan durante la noche. Cinco placas por grupo de prueba se tratan con Devimistat (CPI-613) o disolvente. Las células se lisan in situ con 150 μL de tampón de lisis A [455 μL de solubilizador de proteínas Zoom 2D 1, 2,5 μL de Tris base 1M, 5 μL de cóctel inhibidor de proteasas 100X; 5 μL de DTT 2M] y los lisados de las cinco placas se agrupan en un tubo de microfuga de 1,5 mL y se sonicán en hielo durante 15 pasadas al 50% de potencia. Después de una incubación de 10 minutos a temperatura ambiente, se añaden 2,5 μL de dimetilacrilamida (DMA) y los lisados se incuban durante 10 minutos adicionales. Se añaden 5 μL de DTT 2M para neutralizar el exceso de DMA. Los lisados se centrifugan durante 15 minutos y se recupera el sobrenadante. Luego, 40 μL de lisado se mezclan con 0,8 μL de anfolitos pH 3-10, 0,75 μL de DTT 2M y se completan a 150 μL con solubilizador de proteínas Zoom 2D 1. Se cargan 150 μL de muestra en el corredor IPG, y se añaden tiras IPG pH 3-10NL. Las tiras se remojan durante la noche a temperatura ambiente. Se utiliza un protocolo por etapas para el enfoque isoeléctrico (250V, 20min.; 450V 15min; 750 V 15 min 2000V 30 minutos). Para la segunda dimensión, las tiras se tratan durante 15 minutos en tampón de carga 1X, seguido de 15 minutos en tampón de carga 1X más 160 mM de ácido yodoacético. Las tiras se electroforesan en geles NuPAGE 4-12% Bis Tris ZOOM. Las proteínas se transfieren a membranas de PVDF de 4,5 μm. Las serinas 232, 293 y 300 son objetivos de los tres eventos de fosforilación de PDK bien caracterizados que controlan la actividad de E1. Se cargan cantidades iguales de proteína de células tratadas y tratadas con placebo en geles y las transferencias Western se sondean con anticuerpo anti-E1α como control de coincidencia interna o uno de los tres anticuerpos anti-fosfo-E1α.

• Líneas celulares

  HN6 cells

• Concentraciones

  100 μM

• Tiempo de incubación

  24 h

• Método

  Cells were treated with or without 100 μM Devimistat (CPI-613) for 24 h.

• Modelos animales

  BxPC-3 and H460 cells are injected s.c. into the dorsal flank of CD1 nu/nu mice.

• Dosificaciones

  ≤25 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p.