CP-91149

CP-91149 muestra una actividad inhibidora 200 veces mayor contra la glucógeno fosforilasa a hepática humana (HLGPa) que la cafeína (IC50 = 26 μM). Este compuesto (10-100 μM) inhibe la glucogenólisis -estimulada en hepatocitos de rata aislados de forma dosis-dependiente, y en hepatocitos humanos primarios con una IC50 de ~2,1 μM. [1] También inhibe potentemente las actividades de la fosforilasa muscular humana a y b con IC50 de 0,2 μM y ~0,3 μM, respectivamente. El tratamiento con este químico a 2,5 μM induce la inactivación de la fosforilasa y la activación secuencial de la glucógeno sintasa en hepatocitos, y aumenta la síntesis de glucógeno en 7 veces con 5 mM de glucosa y en 2 veces con 20 mM de glucosa. Puede contrarrestar parcialmente los efectos de la sobreexpresión de la fosforilasa. [2] Este compuesto también inhibe potentemente la GP cerebral con IC50 de 0,5 μM en células A549. El tratamiento a 10-30 μM provoca una acumulación significativa de glucógeno en células A549 y HSF55. Su tratamiento aumenta las células en fase G1 con una reducción significativa de la población en fase S en células HSF55, correlacionada con una mayor expresión de p21 y p27. [3] Este químico también promueve la desfosforilación y activación de la GS (glucógeno sintasa) en células musculares humanas cultivadas no modificadas genéticamente o que sobreexpresan GP, pero exclusivamente en células privadas de glucosa. [4]

La administración oral de CP-91149 a ratones diabéticos ob/ob a 25-50 mg/kg provoca una rápida reducción de la glucosa (3 horas) de 100-120 mg/dl sin producir hipoglucemia, lo que resulta de la inhibición de la glucogenólisis in vivo. El tratamiento con este compuesto no disminuye los niveles de glucosa en ratones normoglucémicos y no diabéticos. [1] En ratas Goto-Kakizaki (GK) no en ayunas, la administración de este químico en combinación con CS-917 suprime la reducción de glucógeno hepático por CS-917 y disminuye la glucosa plasmática más que la administración única de CS-917. [5]

• Ensayo enzimático de Phosphorylase

  La actividad de la glucógeno fosforilasa a hepática humana (HLGPa, 85 ng) se mide en la dirección de la síntesis de glucógeno por la liberación de fosfato del glucosa-1-fosfato a 22°C en 100 μL de tampón que contiene 50 mM Hepes (pH 7,2), 100 mM KCl, 2,5 mM EGTA, 2,5 mM MgCl₂, 0,5 mM glucosa-1-fosfato y 1 mg/mL de glucógeno. El fosfato se mide a 620 nm, 20 minutos después de la adición de 150 μL de HCl 1 M que contiene 10 mg/mL de molibdato de amonio y 0,38 mg/mL de verde de malaquita. Se añaden concentraciones crecientes de este compuesto al ensayo en 5 μL de DMSO al 14%.

• Líneas celulares

  HSF55 and T98G

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of CP-91149 for 72hours. Viability is determined with manual cell counts following staining with trypan blue exclusion assay. Cells are fixed with 70% ethanol. DNA is stained with propidium iodide and the intensity of fluorescence is measured using a Becton-Dickinson flow cytometer at 488nm for excitation and at 650nm for emission. The cell cycle profile is analyzed using Modifit's Sync Wizard.

• Modelos animales

  Obese, diabetic male C57BL/6J-Lep^(ob/ob) mice and their lean, nondiabetic C57BL/6J-/+ littermates

• Dosificaciones

  ~50 mg/kg

• Administración

  Orally