CP-673451

CP 673451 es un inhibidor selectivo de PDGFRα/β con una IC50 de 10 nM/1 nM, exhibe una selectividad >450 veces mayor sobre otros receptores angiogénicos. En tumores de glioblastoma, este compuesto (33 mg/kg) proporciona una inhibición >50% del receptor PDGFR-β durante 4 horas, lo que corresponde a una EC50 de 120 ng/mL en plasma al C_max. En un modelo de angiogénesis con esponja, este inhibidor inhibe el 70% de la angiogénesis estimulada por PDGF-BB a una dosis de 3 mg/kg (q.d. ×5, p.o., lo que corresponde a 5,5 ng/mL al C_max).[1] Este químico disminuye la tasa de proliferación celular a través de mecanismos que implican la reducción de la fosforilación de GSK-3α y GSK-3β. Tanto en cultivos RD como RUCH2, perjudica la capacidad de formación de rabdoesferas y la diferenciación celular, y provoca un aumento de la senescencia. [2]

CP 673451 (administración p.o. una vez al día ?0 días de forma rutinaria) inhibe el crecimiento tumoral (ED50 < 33 mg/kg) en varios xenoinjertos tumorales humanos cultivados s.c. en ratones atímicos, incluyendo el carcinoma pulmonar humano H460, los carcinomas de colon humano Colo205 y LS174T, y el glioblastoma multiforme humano U87MG. [1] En ratones portadores de xenoinjertos RUCH2, este compuesto reduce el crecimiento tumoral y la infiltración de células estromales. [2]

• Ensayo de inhibición de quinasa

  Una construcción del dominio quinasa etiquetado con glutatión S-transferasa de la porción intracelular del PDGFR-β (aminoácidos 693-1401, número de acceso J03278) se expresa en células Sf-9 (sistema de expresión de baculovirus). La cinética enzimática se determina incubando la enzima con concentraciones crecientes de ATP en tampón de fosforilación [50 mmol/L HEPES (pH 7,3), 125 mmol/L NaCl, 24 mmol/L MgCl₂ en placas de 96 pocillos Nunc Immuno MaxiSorp previamente recubiertas con 100 μL de 100 μg/mL de poli-Glu-Tyr (relación 4:1) diluido en PBS. Después de 10 minutos, las placas se lavan (PBS, 0,1% Tween 20), se incuban con anticuerpo anti-fosfotirosina-peroxidasa de rábano y se diluyen en PBS, 0,05% Tween 20, 3% BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las placas se lavan como se indicó anteriormente y se incuban con 3,3

• Líneas celulares

  PAE

• Concentraciones

  ~3000 nM

• Tiempo de incubación

  18 min

• Método

  PAE cells stably expressing full-length PDGFR and VEGFR have been generated. For cell-based selectivity assays, PAE cells are transfected with fulllength human PDGFR-a, PDGFR-h, or VEGFR-2. Cells are seeded at 4×10⁵ cells/mL in 50 μL growth medium (Ham's F-12 media supplemented with 10% fetal bovine serum, 50,000 units each penicillin and streptomycin. After 6 to 8 hours, the growth medium is replaced with 50 μL serum-depleted medium (as above, but with 0.1% fetal bovine serum) and cells are incubated overnight. Immediately before compound addition, the medium was replaced with 95 μL serum-depleted medium. Compounds are diluted in 100% DMSO, added to the cells at a final DMSO concentration of 0.25% v/v, and incubated at 37°C for 10 minutes. Cells are stimulated with the appropriate ligand and incubated as above for an additional 8 minutes. The medium is removed and the cells washed once with PBS, then lysed with 50 μL HNTG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 150 mmol/L NaCl, 2% Triton X-100, 10% glycerol, 5 μmol/L EDTA, 2 mmol/L NaVO₄, and 1 EDTA-free complete protease inhibitor tablet per 25 mL] for 5 minutes at room temperature. Lysates are then diluted with 50 μL HG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 10% glycerol]. The diluted cell lysates are mixed thoroughly, 50 μL of supernatant are transferred to the ELISA capture plate, and incubated at room temperature for 2 hours with agitation. ELISA capture plates are prepared by coating 96-well ReactiBind goat-antirabbit plates with 100 μL/well of 5 μg/mL rabbit anti-human PDGFR-h, anti-PDGFR-a, or anti-VEGFR-2 antibody for 60 to 90 minutes. At the end of the 2-hour incubation the plates are washed (PBS, 0.1% Tween 20) before incubation with anti-phosphotyrosine-horseradish peroxidase antibody (diluted in PBS, 0.05% Tween 20) for 30 minutes at room temperature. The plates are washed again, then incubated with tetramethylbenzidine and evaluated as described above. IC50 values are calculated as percent inhibition of control.

• Modelos animales

  Athymic female mice

• Dosificaciones

  3, 10, or 33 mg/kg

• Administración

  Oral gavage