Hoja de datos

Descripción biológica

Especificidad	Collagen VII Antibody [K3G14] detecta los niveles endógenos de la proteína total de Colágeno VII.
Antecedentes	El colágeno VII es un colágeno fibrilar especializado, principal responsable de formar las fibrillas de anclaje que estabilizan la unión dermoepidérmica en la piel. Está codificado por el gen COL7A1 y se expresa predominantemente en queratinocitos epidérmicos y fibroblastos dérmicos. Estructuralmente, el colágeno VII es un homotrímero compuesto por tres cadenas pro-α1(VII), cada una con un dominio central de triple hélice (~1.530 aminoácidos) interrumpido por 19 imperfecciones, incluida una región de “bisagra” de 39 aminoácidos sensible a proteasas. Este dominio central está flanqueado por dos dominios no colagenosos: NC-1 en el N-terminal, que contiene módulos adhesivos como repeticiones de fibronectina tipo III y un dominio A del factor de von Willebrand, y NC-2 en el C-terminal, que incluye un segmento similar a un inhibidor de proteasas de Kunitz. Dos moléculas de colágeno VII se ensamblan en dímeros antiparalelos estabilizados por enlaces disulfuro y se agregan aún más en fibrillas de anclaje. Funcionalmente, el colágeno VII ancla la membrana basal a la dermis subyacente al unirse con alta afinidad a componentes de la membrana basal como la laminina-332 y el colágeno IV, manteniendo así la integridad de la piel; sus mutaciones causan epidermólisis bullosa distrófica (EBD), un trastorno cutáneo grave con ampollas.

Especificidad

Collagen VII Antibody [K3G14] detecta los niveles endógenos de la proteína total de Colágeno VII.

Antecedentes

El colágeno VII es un colágeno fibrilar especializado, principal responsable de formar las fibrillas de anclaje que estabilizan la unión dermoepidérmica en la piel. Está codificado por el gen COL7A1 y se expresa predominantemente en queratinocitos epidérmicos y fibroblastos dérmicos. Estructuralmente, el colágeno VII es un homotrímero compuesto por tres cadenas pro-α1(VII), cada una con un dominio central de triple hélice (~1.530 aminoácidos) interrumpido por 19 imperfecciones, incluida una región de “bisagra” de 39 aminoácidos sensible a proteasas. Este dominio central está flanqueado por dos dominios no colagenosos: NC-1 en el N-terminal, que contiene módulos adhesivos como repeticiones de fibronectina tipo III y un dominio A del factor de von Willebrand, y NC-2 en el C-terminal, que incluye un segmento similar a un inhibidor de proteasas de Kunitz. Dos moléculas de colágeno VII se ensamblan en dímeros antiparalelos estabilizados por enlaces disulfuro y se agregan aún más en fibrillas de anclaje. Funcionalmente, el colágeno VII ancla la membrana basal a la dermis subyacente al unirse con alta afinidad a componentes de la membrana basal como la laminina-332 y el colágeno IV, manteniendo así la integridad de la piel; sus mutaciones causan epidermólisis bullosa distrófica (EBD), un trastorno cutáneo grave con ampollas.

Información de uso

Aplicación

IHC-Fr

Dilución

IHC

1:300 - 1:600

Reactividad

Human

Fuente

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampón de almacenamiento

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Almacenamiento
(Desde la fecha de recepción)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Métodos experimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Métodos experimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19945621/

Datos de aplicación

IHC

Validado por Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F3214 at 1:500 dilution.