CFSE

Preparación de la solución de trabajo de CFDA-SE
1.1 Preparación de la solución madre
Disuelva 1 mg de CFDA-SE en 0,1794 mL de DMSO para obtener 10 mM de CFSE.
Nota: Se recomienda almacenar la solución madre a -20 ℃ o -80 ℃ lejos de la luz y evitar ciclos repetitivos de congelación-descongelación.
1.2 Preparación de esta solución de trabajo química
Diluya la solución madre en medio de cultivo celular sin suero o PBS para obtener 5-10 μM de esta solución de trabajo química.
Nota: Ajuste la concentración de esta solución de trabajo química según la situación real.
Tinción celular
2.1 Para células en suspensión: Centrifugue a 1000 g a 4℃ durante 3-5 minutos y luego deseche el sobrenadante. Lave dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
Para células adherentes: Deseche el medio de cultivo celular y agregue tripsina para disociar las células y obtener una suspensión unicelular. Centrifugue a 1000 g a 4℃ durante 3-5 minutos y luego deseche el sobrenadante. Lave dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
2.2 Agregue 1 mL de esta solución de trabajo química y luego incube a temperatura ambiente durante 30 minutos.
2.3 Centrifugue a 400 g a 4℃ durante 3-4 minutos y luego deseche el sobrenadante.
2.4 Lave dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
2.5 Resuspenda las células con medio de cultivo celular sin suero o PBS, y luego detecte con un microscopio de fluorescencia o un citómetro de flujo.

El marcaje in vivo de células con CFSE es factible sin prácticamente ningún efecto tóxico en las células marcadas o adyacentes. Presenta ventajas en estudios de migración a largo plazo, como lo demuestra la recuperación de células T en los órganos linfoides periféricos[2].

• Líneas celulares

  human erythroleukaemic cell line K562, mouse lymphoma cell line YAC-1, human mammary cancer cell line MCF-7 and human melanoma cell line A375

• Concentraciones

  2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM

• Tiempo de incubación

  5, 6, 7, 8, 10 and 15 min

• Método

  The 5 mM CFDA-SE stock in DMSO is diluted to different concentrations(2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM) in PBS with a total volume of 1 ml. After each cell line is harvested and washed three times with PBS, 1×10⁹ cells are added to equal volume of this compound with different concentrations and incubated at 37°C for 5, 6, 7, 8, 10 and 15 min with agitation. The labeling reaction is stopped for 1 min by adding an equal volume of heat inactivated fetal bovine serum. The CFDA-SE labeled cells are washed twice with PBS and recounted, and the cell concentration is adjusted to 6×104cells/ml in IMDM containing 10% FCS.

• Modelos animales

  C57Bl/6 mice

• Dosificaciones

  10 μM

• Administración

  injected into thymic lobe