Hoja de datos

Descripción biológica

Especificidad	CaV1.3 Antibody [G19D14] detecta niveles endógenos de la proteína CaV1.3 total.
Antecedentes	El acoplamiento excitación-contracción cardíaca se refiere a la secuencia de eventos en los que la estimulación eléctrica de un cardiomiocito desencadena la contracción muscular en el corazón. Los canales de Ca²⁺ de tipo L son críticos para este proceso, ya que facilitan la entrada de calcio y contribuyen a la excitabilidad de la membrana. Se han identificado cuatro subtipos de canales de Ca²⁺ de tipo L: Cav1.1, Cav1.2, Cav1.3 y Cav1.4. Cav1.1 se encuentra predominantemente en el músculo esquelético, mientras que Cav1.4 se expresa principalmente en la retina y ciertas células inmunitarias. Cav1.3 está presente en el corazón, las regiones somatodendríticas de las neuronas, las células endocrinas y las células sensoriales. En el corazón, la actividad de Cav1.3 está modulada por múltiples neurotransmisores. La fosforilación por la proteína quinasa A (PKA) dependiente de cAMP ocurre en los residuos de serina 1743 y 1816 dentro de la región C-terminal. La proteína quinasa C (PKC) también regula Cav1.3 de manera isoenzima-específica a través de la fosforilación en la serina 81 en el dominio N-terminal. Además, el empalme alternativo dentro del C-terminal influye en el comportamiento del canal, disminuyendo notablemente la inactivación dependiente de Ca²⁺. Funcionalmente, Cav1.3 contribuye al marcapasos cardíaco y a la conducción atrioventricular (AV). La disfunción de Cav1.3 se ha asociado con anomalías del nódulo sinoauricular y del nódulo AV, así como con el desarrollo de fibrilación auricular.

Especificidad

CaV1.3 Antibody [G19D14] detecta niveles endógenos de la proteína CaV1.3 total.

Antecedentes

El acoplamiento excitación-contracción cardíaca se refiere a la secuencia de eventos en los que la estimulación eléctrica de un cardiomiocito desencadena la contracción muscular en el corazón. Los canales de Ca²⁺ de tipo L son críticos para este proceso, ya que facilitan la entrada de calcio y contribuyen a la excitabilidad de la membrana. Se han identificado cuatro subtipos de canales de Ca²⁺ de tipo L: Cav1.1, Cav1.2, Cav1.3 y Cav1.4. Cav1.1 se encuentra predominantemente en el músculo esquelético, mientras que Cav1.4 se expresa principalmente en la retina y ciertas células inmunitarias. Cav1.3 está presente en el corazón, las regiones somatodendríticas de las neuronas, las células endocrinas y las células sensoriales. En el corazón, la actividad de Cav1.3 está modulada por múltiples neurotransmisores. La fosforilación por la proteína quinasa A (PKA) dependiente de cAMP ocurre en los residuos de serina 1743 y 1816 dentro de la región C-terminal. La proteína quinasa C (PKC) también regula Cav1.3 de manera isoenzima-específica a través de la fosforilación en la serina 81 en el dominio N-terminal. Además, el empalme alternativo dentro del C-terminal influye en el comportamiento del canal, disminuyendo notablemente la inactivación dependiente de Ca²⁺. Funcionalmente, Cav1.3 contribuye al marcapasos cardíaco y a la conducción atrioventricular (AV). La disfunción de Cav1.3 se ha asociado con anomalías del nódulo sinoauricular y del nódulo AV, así como con el desarrollo de fibrilación auricular.

Información de uso

Aplicación

IHC, FCM

Dilución

IHC

1:100

Reactividad

Human, Mouse

Fuente

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampón de almacenamiento

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Almacenamiento
(Desde la fecha de recepción)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Métodos experimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Métodos experimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37025382/

Datos de aplicación

IHC

Validado por Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human colorectal cancer tissue with F3798 at 1:1000 dilution.