AZD5363 (Capivasertib)

Capivasertib (AZD5363) es un potente inhibidor de Akt con IC50 de 3 nM, 8 nM y 8 nM para Akt1, Akt2 y Akt3, respectivamente. [1] Inhibe la fosforilación de los sustratos de Akt en las células con una potencia de aproximadamente 0,3 a 0,8 μM. Este compuesto inhibe la proliferación de 41 de 182 líneas celulares tumorales sólidas y hematológicas con una potencia de < 3 μM. [2] Las mutaciones activadoras en PIK3CA, la pérdida o inactivación del supresor tumoral PTEN, o la amplificación de HER2 son significativamente predictivas de la respuesta a AZD5363. Además, también se observa una correlación entre el estado de mutación RAS de las líneas celulares y la resistencia al mismo. [1]

La dosificación oral de Capivasertib (AZD5363) (100, 300 mg/kg) a ratones desnudos provoca una reducción dosis y tiempo-dependiente de la fosforilación de PRAS40, GSK3β y S6 en xenoinjertos BT474c, aumentos reversibles en las concentraciones de glucosa en sangre y disminuciones dosis-dependientes en la captación de 2[¹⁸F]fluoro-2-desoxi-d-glucosa (¹⁸F-FDG) en xenoinjertos U87-MG. La dosificación oral crónica de este compuesto (130, 200 y 300 mg/kg) provoca una inhibición del crecimiento dosis-dependiente de xenoinjertos derivados de varios tipos de tumores, incluidos modelos de cáncer de mama HER2+.

• Ensayo de cambio de movilidad por incubación off-chip Caliper

  La capacidad de Capivasertib (AZD5363) y otros compuestos para inhibir la actividad de AKT1, AKT2 y AKT3 se evalúa mediante el ensayo Caliper Off-Chip Incubation Mobility Shift. Se incuban AKT1, AKT2 o AKT3 recombinantes activas con un sustrato peptídico sintetizado a medida marcado con 5-FAM junto con concentraciones crecientes de este compuesto. Las reacciones finales contenían de 1 a 3 nM de enzimas AKT1, AKT2 o AKT3; 1,5 mM de sustrato peptídico; ATP a K _m para cada isoforma de AKT; 10 mM de MgCl₂, 4 mM de DTT, 100 mM de HEPES y 0,015% de Brij-35. Las reacciones se incuban a temperatura ambiente durante 1 hora y se detienen mediante la adición de un tampón que contiene 100 mM de HEPES, 0,015% de solución de Brij-35, 0,1% de reactivo de recubrimiento, 40 mM de EDTA y 5% de DMSO. Las placas se analizan luego usando un Caliper LC3000, lo que permite la separación del sustrato peptídico y el producto fosforilado por electroforesis con posterior detección y cuantificación de la fluorescencia inducida por láser.

• Líneas celulares

  182 solid and hematologic tumor cell lines

• Concentraciones

  ~30 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cell proliferation assay is determined by 2 methods, MTS and Sytox Green, using Capivasertib (AZD5363). Briefly, cells are seeded in 96-well plates and incubated overnight at 37 ℃, 5% CO₂. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.003μM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer's protocol. For the Sytox Green endpoint, Sytox Green nucleic acid dye diluted in TBS-EDTA buffer is added to cells (final concentration of 0.13 μM) and the number of dead cells detected using an Acumen Explorer. Cells are then permeabilized by the addition of saponin (0.03% final concentration, diluted in TBS-EDTA buffer), incubated overnight and a total cell count measured. Predose measurements are made for both MTS and Sytox Green endpoints, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells values are determined using absorbance readings (MTS) or live cell counts.

• Modelos animales

  Female nude mice and male SCID mice with BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 xenografts.

• Dosificaciones

  130 mg/Kg - 300 mg/Kg

• Administración

  p.o.