BX-912

N.º de catálogoS1275 Lote:S127501

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₀H₂₃BrN₈O

Peso molecular

471.35

Número CAS

702674-56-4

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

94 mg/mL (199.42 mM)

Ethanol

94 mg/mL (199.42 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	30.000mg/ml (63.65mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

BX912 es un potente y específico inhibidor de PDK1 con una IC50 de 12 nM, 9 y 105 veces mayor selectividad por PDK1 que por PKA y PKC en ensayos libres de células, respectivamente. En comparación con GSK3 , la selectividad por PDK1 es 600 veces mayor.

Objetivos

PDK-1 (Cell-free assay)	PKA (Cell-free assay)	KDR (Cell-free assay)	CDK2/CyclinE (Cell-free assay)	Chk1 (Cell-free assay)	Ver más
12 nM	110 nM	410 nM	650 nM	830 nM	Ver más

In vitro

BX912 previene ChcK1, PKA, c-kit y KDR con IC50 de 0,83, 0,11, 0,85 y 0,41 , respectivamente. BX912 bloquea la señalización de PDK1/Akt en células tumorales y suprime el crecimiento dependiente del anclaje de una variedad de líneas celulares tumorales (como las células PC-3) en cultivo o induce la apoptosis. Varias líneas celulares cancerosas (como el cáncer de mama MDA-468) con actividad Akt elevada son >30 veces más sensibles a la inhibición del crecimiento por el inhibidor de PDK1 BX912 en agar blando que en plástico de cultivo tisular, lo que concuerda con la función de supervivencia celular de la vía de señalización PDK1/Akt, que es particularmente importante para las células no adheridas. BX912 bloquea potentemente la actividad enzimática de PDK1 en un formato de ensayo de quinasa directa, aunque BX912 no logra bloquear la actividad de AKT2 preactivada (IC50 > 10 ). Por lo tanto, BX-912 es un inhibidor directo de PDK1. BX912 es un inhibidor competitivo de la actividad de PDK1 con respecto a su sustrato, el ATP, lo que sugiere que BX912 se une al bolsillo de unión de ATP de PDK1. El esqueleto de aminopirimidina de BX912 adopta una orientación similar en el sitio activo de PDK1. BX912 promueve un aumento pronunciado en la población de células MDA-468 con contenido de ADN 4 N, lo que indica un bloqueo en la fase G2/M del ciclo celular. BX912 también inhibe potentemente el crecimiento de las células HCT-116 en agar blando, mostrando un efecto inhibidor del 96% a una dosis de 1 . BX912 inhibe potentemente el crecimiento de las células PC-3 en agar blando, mostrando una IC50 de 0,32 .

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos de quinasa PDK1 se ensaya en un ensayo de quinasa directo y en un formato de ensayo acoplado que mide la activación de AKT2 mediada por PDK1 y PtdIns-3,4-P2. Para el ensayo acoplado, la mezcla de ensayo final (60 L) contenía: 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL de albúmina de suero bovino, 18 mM -glicerol fosfato, 0,7 mM ditiotreitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de sustrato peptídico biotinilado (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L de vesículas fosfolipídicas que contenían PtdIns-3,4-P2, 60 pg de PDK1 humano recombinante purificado y 172 ng de AKT2 humano recombinante purificado. Después de la incubación durante 2 horas a temperatura ambiente, el péptido marcado con biotina se captura de 10 L de la mezcla de ensayo en perlas SPA recubiertas de estreptavidina, y la formación del producto se mide por proximidad de centelleo en un contador Wallac MicroBeta. El producto formado es proporcional al tiempo de incubación y a la cantidad de PDK1 y AKT2 inactiva añadida. PDK1 se añade a niveles subóptimos para que el ensayo pueda detectar sensiblemente los inhibidores de la activación de AKT2, así como el inhibidor directo BX912 de PDK1 o AKT2. Para medir la actividad de PDK1 directamente, la mezcla de ensayo final (60 L) contenía 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% -mercaptoetanol, 1 mg/mL de albúmina de suero bovino, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de péptido sustrato (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) y 60 ng de PDK1 humano recombinante purificado. Después de 4 horas a temperatura ambiente, se añaden 25 mM de EDTA y se detecta una porción de la mezcla de reacción en papel de fosfocelulosa P81. El papel de filtro se lava tres veces con 0,75% de ácido fosfórico y una vez con acetona. Después de secar, el péptido marcado unido al filtro se cuantifica utilizando un fósforoimager.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares MDA-468, MDA-453 Concentraciones 0.001-1 μM Tiempo de incubación 72 hours Método Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos de quinasa
PDK1 se ensaya en un ensayo de quinasa directo y en un formato de ensayo acoplado que mide la activación de AKT2 mediada por PDK1 y PtdIns-3,4-P2. Para el ensayo acoplado, la mezcla de ensayo final (60 L) contenía: 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL de albúmina de suero bovino, 18 mM -glicerol fosfato, 0,7 mM ditiotreitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de sustrato peptídico biotinilado (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L de vesículas fosfolipídicas que contenían PtdIns-3,4-P2, 60 pg de PDK1 humano recombinante purificado y 172 ng de AKT2 humano recombinante purificado. Después de la incubación durante 2 horas a temperatura ambiente, el péptido marcado con biotina se captura de 10 L de la mezcla de ensayo en perlas SPA recubiertas de estreptavidina, y la formación del producto se mide por proximidad de centelleo en un contador Wallac MicroBeta. El producto formado es proporcional al tiempo de incubación y a la cantidad de PDK1 y AKT2 inactiva añadida. PDK1 se añade a niveles subóptimos para que el ensayo pueda detectar sensiblemente los inhibidores de la activación de AKT2, así como el inhibidor directo BX912 de PDK1 o AKT2. Para medir la actividad de PDK1 directamente, la mezcla de ensayo final (60 L) contenía 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% -mercaptoetanol, 1 mg/mL de albúmina de suero bovino, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de péptido sustrato (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) y 60 ng de PDK1 humano recombinante purificado. Después de 4 horas a temperatura ambiente, se añaden 25 mM de EDTA y se detecta una porción de la mezcla de reacción en papel de fosfocelulosa P81. El papel de filtro se lava tres veces con 0,75% de ácido fosfórico y una vez con acetona. Después de secar, el péptido marcado unido al filtro se cuantifica utilizando un fósforoimager.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
MDA-468, MDA-453
Concentraciones
0.001-1 μM
Tiempo de incubación
72 hours
Método
Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15772071/

Validación de productos por parte del cliente

: , , Oncotarget, 2014, 5(21):10732-44.

: Datos de [ , , Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305 ]

Sellecks BX-912 Ha sido citado por 14 Publicaciones

Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304]	PubMed: 35704690
The 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 is an essential upstream activator of protein kinase A in malaria parasites [ PLoS Biol, 2021, 19(12):e3001483]	PubMed: 34879056
Effects of inhibiting PDK‑1 expression in bone marrow mesenchymal stem cells on osteoblast differentiation in vitro [ Mol Med Rep, 2021, 23(2)118]	PubMed: 33300048
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331
Biphasic Mathematical Model of Cell-Drug Interaction That Separates Target-Specific and Off-Target Inhibition and Suggests Potent Targeted Drug Combinations for Multi-Driver Colorectal Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 13;12(2) pii: E436]	PubMed: 32069833
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790]	PubMed: 31160710
Discoidin Domain Receptor 2 Signaling Regulates Fibroblast Apoptosis through PDK1/Akt [Jia S Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305]	PubMed: 29652518
Systematic Functional Characterization of Resistance to PI3K Inhibition in Breast Cancer. [ Cancer Discov, 2016, 6(10):1134-1147]	PubMed: 27604488

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