BRD4770

N.º de catálogoS7591 Lote:S759102

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₅H₂₃N₃O₃

Peso molecular

413.47

Número CAS

1374601-40-7

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

20 mg/mL (48.37 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1mg/ml (2.42mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.14mg/ml (0.34mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2.8 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

BRD4770 es un inhibidor de histone methyltransferase G9a con una IC50 de 6,3 μM, e induce la senescencia celular.

Objetivos

G9a

In vitro

BRD4770 reduce los niveles celulares de H3K9 di- y trimetilado a través de la inhibición de G9a, induce la senescencia e inhibe la proliferación tanto dependiente como independiente del anclaje en la línea celular de cáncer de páncreas PANC-1. La combinación de gossypol y este compuesto aumenta los niveles de LC3-II y el número de autofagosomas, y por lo tanto actúa en sinergia para inducir la muerte celular en las células PANC-1.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Actividad bioquímica de G9a Los inmunoensayos de fluorescencia con lantanuro mejorados por disociación (DELFIA) se realizan en placas de 384 pocillos blancas y opacas recubiertas con Neutravidina. Los compuestos de prueba se diluyen a 12 μg/mL en 50 mM Tris-HCl pH 8,5 que contiene 4% de DMSO y se dispensan 10 μL en los pocillos. Los pocillos en blanco y de control solo recibieron tampón del compuesto. GST-G9a a 10 μg/mL y SAM a 40 μM se diluyen en 50 mM Tris HCl pH 8,5/10 mM DTT y se añaden en un volumen de 20 μL. Los pocillos en blanco reciben solo tampón Tris/DTT. Las reacciones se inician con la adición de 800 nM de sustrato H3(1-20)-cysbiotina en 50 mM Tris pH 8,5 en un volumen de 10 μL, y se incuban a temperatura ambiente durante 60 minutos. Las placas se lavan 3 veces con 100 μL de Tampón de Lavado (50 mM Tris pH 7,4, 150 mM NaCl, 0,05% Tween 20, 0,2% BSA). A continuación, se añaden 50 μL de Tampón de Fluoroensayo (FI) (50 mM Tris HCl pH 7,8, 150 mM NaCl, 0,05% Tween 40, 25 μM DTPA, 0,2% BSA, 0,05% BGG) que contienen 5 ng de α-2X-di-met H3-K9 y 5 ng de quelato de Eu de cabra anti-conejo a todos los pocillos de la placa, y la placa se incuba durante una hora adicional a temperatura ambiente. Las placas se lavan 3 veces con 100 μL de Tampón de Lavado, y se añaden 50 μL de Solución de Mejora a cada pocillo. La fluorescencia resuelta en el tiempo se mide después de 45 minutos en un Viewlux Microplate Imager, tomando imágenes durante 15 segundos con una ventana de 354 μs, un retardo de 400 μs, excitación a 360 nm y emisión a 618 nm.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares PANC-1 cells Concentraciones ~20 μM Tiempo de incubación 72 hours Método PANC-1 cells are seeded and treated with BRD4770 in 6-well plates for 72 h. Cells are trypsinized and tested for soft agar colony formation using CytoSelect 96-Well Cell Transformation Assay, using the CyQuant GR dye to measure total cellular nucleic acid levels. Fluorescence is detected with an Analyst HT plate reader using a 485/520 nm filter set.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Actividad bioquímica de G9a
Los inmunoensayos de fluorescencia con lantanuro mejorados por disociación (DELFIA) se realizan en placas de 384 pocillos blancas y opacas recubiertas con Neutravidina. Los compuestos de prueba se diluyen a 12 μg/mL en 50 mM Tris-HCl pH 8,5 que contiene 4% de DMSO y se dispensan 10 μL en los pocillos. Los pocillos en blanco y de control solo recibieron tampón del compuesto. GST-G9a a 10 μg/mL y SAM a 40 μM se diluyen en 50 mM Tris HCl pH 8,5/10 mM DTT y se añaden en un volumen de 20 μL. Los pocillos en blanco reciben solo tampón Tris/DTT. Las reacciones se inician con la adición de 800 nM de sustrato H3(1-20)-cysbiotina en 50 mM Tris pH 8,5 en un volumen de 10 μL, y se incuban a temperatura ambiente durante 60 minutos. Las placas se lavan 3 veces con 100 μL de Tampón de Lavado (50 mM Tris pH 7,4, 150 mM NaCl, 0,05% Tween 20, 0,2% BSA). A continuación, se añaden 50 μL de Tampón de Fluoroensayo (FI) (50 mM Tris HCl pH 7,8, 150 mM NaCl, 0,05% Tween 40, 25 μM DTPA, 0,2% BSA, 0,05% BGG) que contienen 5 ng de α-2X-di-met H3-K9 y 5 ng de quelato de Eu de cabra anti-conejo a todos los pocillos de la placa, y la placa se incuba durante una hora adicional a temperatura ambiente. Las placas se lavan 3 veces con 100 μL de Tampón de Lavado, y se añaden 50 μL de Solución de Mejora a cada pocillo. La fluorescencia resuelta en el tiempo se mide después de 45 minutos en un Viewlux Microplate Imager, tomando imágenes durante 15 segundos con una ventana de 354 μs, un retardo de 400 μs, excitación a 360 nm y emisión a 618 nm.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
PANC-1 cells
Concentraciones
~20 μM
Tiempo de incubación
72 hours
Método
PANC-1 cells are seeded and treated with BRD4770 in 6-well plates for 72 h. Cells are trypsinized and tested for soft agar colony formation using CytoSelect 96-Well Cell Transformation Assay, using the CyQuant GR dye to measure total cellular nucleic acid levels. Fluorescence is detected with an Analyst HT plate reader using a 485/520 nm filter set.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536950/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23807219/

Sellecks BRD4770 Ha sido citado por 7 Publicaciones

T Cells Spatially Regulate B Cell Receptor Signaling in Lymphomas through H3K9me3 Modifications [ Adv Healthc Mater, 2024, e2401192.]	PubMed: 38837879
BRD4770 inhibits vascular smooth muscle cell proliferation via SUV39H2, but not EHMT2 to protect against neointima formation [ Hum Cell, 2023, 10.1007/s13577-023-00924-4]	PubMed: 37306883
The CHCHD2/Sirt1 corepressors involve in G9a-mediated regulation of RNase H1 expression to control R-loop [ Cell Insight, 2023, 2(4):100112]	PubMed: 37388553
BRD4770 functions as a novel ferroptosis inhibitor to protect against aortic dissection [ Pharmacol Res, 2022, 177:106122]	PubMed: 35149187
G9a Promotes Breast Cancer Recurrence through Repression of a Pro-inflammatory Program [ Cell Rep, 2020, 33(5):108341]	PubMed: 33147463
Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193
The histone methyltransferase G9a: a new therapeutic target in biliary tract cancer [Mayr C, et al. Hum Pathol, 2018, 72:117-126]	PubMed: 29133140

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