BPTES

BPTES inhibe la actividad de la glutaminasa expresada en células de riñón humano con una IC50 de 0,18 μM, e inhibe el eflujo de glutamato por la microglía con una IC50 de 80-120 nM. [1] Este compuesto ralentiza preferentemente el crecimiento celular en células D54 con IDH1 mutante. También inhibe la actividad de la glutaminasa, disminuye los niveles de glutamato y α-KG, y aumenta los intermediarios glucolíticos. [2] Este químico (10 μM) inhibe el crecimiento celular de células mHCC 3–4 derivadas de tumores LAP/MYC. También inhibe el crecimiento de células P493 dependientes de MYC bloqueando la replicación del ADN, lo que lleva a la muerte y fragmentación celular. [3]

En ratones LAP/MYC, BPTES (12,5 mg/kg, i.p.) prolonga la supervivencia sin efectos significativos sobre los niveles de MYC, GLS o GLS2. Este compuesto (200 μg/ratón, i.p.) también inhibe el crecimiento de células tumorales en ratones que albergan xenoinjertos tumorales P493. [3]

• Inhibición de Glutaminase: Ensayo sin células

  Las placas de ensayo se preparan con 2 μL de compuesto de prueba en DMSO/pocillo. La enzima se diluye a 1 unidad (hígado) o 0,8 unidades (riñón)/100 μL en tampón de ensayo de glutaminasa, y se añaden 100 μL de enzima diluida a cada pocillo de la placa de ensayo mediante Multidrop. El contenido se mezcla agitando a toda velocidad durante 1 minuto en TiterMix 100. Las placas se preincuban a temperatura ambiente (TA) durante 20 minutos para permitir la unión de los compuestos de prueba a la glutaminasa, y se añaden 50 μL de solución de glutamina (7 mM en tampón de ensayo) a cada pocillo mediante Multidrop. El contenido se agita a toda velocidad durante 30 segundos en TiterMix 100, y las placas se incuban luego a TA durante 60 minutos (hígado) o 90 minutos (riñón). Para detener las reacciones, se añaden 20 μL de HCl (0,3 N) a cada pocillo mediante Multidrop y se mezclan inmediatamente agitando durante 30 segundos en TiterMix 100. Para la cuantificación, el glutamato (formado por hidrólisis de glutamina catalizada por glutaminasa) se oxida a 2-oxoglutarato por una segunda enzima, la glutamato deshidrogenasa (GDH), con la producción concomitante de la forma reducida de nicotinamida adenina dinucleótido (NADH). La reducción del nitro blue tetrazolium (NBT) en la solución de ensayo por NADH, catalizada por fenazina metosulfato (PMS), da como resultado la formación de un formazán azul-púrpura. La absorción del formazán a 540 nm es linealmente proporcional a la concentración de glutamato hasta 200 μM. Se añade el reactivo NBT/GDH (50 μL) a cada pocillo mediante Multidrop y se mezcla agitando durante 30 segundos en TiterMix 100, y las placas se incuban a TA durante 20 minutos para permitir la formación de color por la reacción de la GDH. La concentración de glutamato se determina a partir de la concentración de formazán según lo determinado por la lectura de DO540 nm en un SpectraMax 340.

• Líneas celulares

  D54 cells

• Concentraciones

  --

• Tiempo de incubación

  48 h

• Método

  Cell growth assays are carried out using alamarBlue. Cells are plated at a density of 500 cells/well in a 96-well black clear bottom plate. At 24 hrs, media is changed to the appropriate media (DMEM with 4.5 g/L, 1.5 g/L or 0.1 g/L glucose, 10% FBS, pencillin/streptomycin, and 4 mM glutamine). 48 hours after plating, compounds or DMSO are added. Media and alamarBlue is added to a volume of 200 礚 in each well. Fluorescence is measured at 48 hrs (AOA, this compound) using a Victor3 plate-reader.

• Modelos animales

  LAP/MYC mice

• Dosificaciones

  12.5 mg/kg

• Administración

  i.p.