BMS-986142

En células B estimuladas a través del receptor de células B (BCR), BMS-986142 inhibe potentemente la señalización y los puntos finales funcionales, incluyendo el flujo de calcio (IC50 = 9 nM), la producción de citocinas, la proliferación y la expresión superficial de la molécula coestimuladora CD86 (IC50 = 3–4 nM). En células T, la fosforilación de PLCγ1 catalizada por ITK estimulada a través del receptor de células T (TCR) es al menos 45 veces menos potentemente inhibida por este compuesto que los puntos finales de señalización dependientes de BTK en células B, como se esperaba según la selectividad de 30 veces para BTK sobre ITK en los ensayos enzimáticos[2].

En estudios farmacocinéticos multiespecie, la biodisponibilidad oral absoluta de BMS-986142 es del 93 % en ratones, 67 % en ratas, 33 % en monos cinomolgos y 100 % en perros. El aclaramiento plasmático corporal total de este compuesto es bajo en todas las especies. El gran volumen de distribución en estado estacionario observado es indicativo de distribución extravascular, a pesar de la alta unión a proteínas. Sin embargo, la penetración cerebral es muy baja en ratas (<5 % de la concentración plasmática). Este compuesto bloquea el aumento de proteinuria grave en un modelo de ratón NZB/W propenso a lupus in vivo. El tratamiento con esta sustancia química proporciona una protección robusta contra la nefritis tubulointersticial y glomerular, así como la infiltración inflamatoria[2].

• Ensayo de la enzima BTK recombinante humana

  Se añadieron compuestos de prueba, BTK recombinante humana (1 nM), péptido fluoresceinado (1,5 μM), ATP (20 μM) y tampón de ensayo (20 mM HEPES a pH 7,4, 10 mM MgCl2, 0,015 % de tensioactivo Brij 35 y 4 mM DTT en 1,6 % de DMSO) a placas de 384 pocillos con fondo en V, con un volumen final de 30 μL. Después de incubar a temperatura ambiente durante 60 minutos, la reacción se detuvo añadiendo 45 μL de EDTA 35 mM a cada muestra. La mezcla de reacción se analizó mediante separación electroforética del sustrato fluorescente y el producto fosforilado. Los datos de inhibición se calcularon por comparación con las reacciones de control sin enzima (para una inhibición del 100 %) y los controles sin inhibidor (para una inhibición del 0 %). Se generaron curvas de dosis-respuesta para determinar la concentración requerida para inhibir el 50 % de la actividad de BTK (IC50). Este compuesto se disolvió a 10 mM en DMSO y se evaluó en 11 concentraciones.

• Líneas celulares

  Ramos B cells

• Concentraciones

  0.4, 1.6, 6, 25, 100 and 400 nM

• Tiempo de incubación

  1 h

• Método

  B-cell receptor (BCR)-stimulated phospholipase C (PLC)-γ2 phosphorylation in Ramos B cells: After 1 hour of pre-incubation of Ramos B cells in media containing 10% fetal bovine serum (FBS) with varying concentrations of this compound at 37°C, the cells are stimulated with AffiniPure F(ab’)2 fragment goat anti-human immunoglobulin (Ig)M at 50 μg/mL for exactly 2 minutes at 37°C, followed by addition of ice-cold phosphate-buffered saline for quenching. The cells are pelleted and lysed, and PLCγ2 levels are measured by immunoblot using rabbit anti-human phosphoY759-PLCγ2 and analyzed using the Odyssey Infrared Imaging System with normalization to an actin control to ensure consistent loading.

• Modelos animales

  female NZB/W lupus-prone mouse model

• Dosificaciones

  30 mg/kg

• Administración

  by oral gavage