BMS-345541

BMS-345541 inhibe de forma dosis-dependiente la fosforilación de IκBα estimulada por TNF-α en células monocíticas THP-1 con una IC50 de ~4 μM. Este compuesto inhibe el factor de necrosis tumoral α, la interleucina-1β, la interleucina-8 y la interleucina-6 estimulados por lipopolisacáridos en células THP-1 con valores de IC50 en el rango de 1 a 5 μM. Se une de manera mutuamente excluyente con respecto a un inhibidor peptídico correspondiente a los aminoácidos 26 - 42 de IκBα con Ser-32 y Ser-36 cambiadas a aspartatos y de manera no mutuamente excluyente con respecto al ADP. Esta sustancia química se une a sitios alostéricos similares en IKK-1 e IKK-2, lo que luego afecta los sitios activos de las subunidades de manera diferente. [1] Afecta varias transiciones del ciclo celular mitótico, incluyendo la entrada mitótica, la progresión de la prometafase a la anafase y la citocinesis. La adición de este compuesto a las células liberadas del arresto en fase G bloquea la activación de Aurora A, B y C, la activación de Cdk1 y la fosforilación de histona H3. El tratamiento de las células mitóticas con esta sustancia química resulta en una degradación precoz de ciclina B1 y securina, una separación cromosómica defectuosa y una citocinesis inadecuada. También se ha encontrado que anula el punto de control del huso en células arrestadas por nocodazol. Estos efectos no se deben principalmente a un efecto inhibidor directo de este compuesto sobre quinasas mitóticas como Cdk1, Aurora A o B, Plk1 o NEK2. [2] Este compuesto (10 μM) inhibe el crecimiento de melanocitos epidérmicos humanos normales y células de melanoma metastásico (SK-MEL-5, A375 y Hs 294T) en un 96 % y 99 % a las 72 h, respectivamente. La aplicación de 100 μM del mismo a cultivos de células SK-MEL-5 da como resultado un 87 % de células apoptóticas a las 24 h a través de una vía mediada por mitocondrias independiente de caspasa y dependiente de AIF. El tratamiento con esta sustancia química (10 μM) resulta en una reducción del 76 % y 95 % en las actividades de IKK y NF-kB, así como en la producción de CXCL1. [3] Inhibe el crecimiento de las líneas celulares de leucemia linfoblástica aguda de células T (T-ALL) BE-13, RPMI-8402 y DND-41, las tres con una mutación Notch1, y células primarias de T-ALL de pacientes pediátricos, con una IC50 de 2-6 μM. 5 μM de este compuesto inducen un arresto en la fase G2/M del ciclo celular en células BE-13 y DND-41, y un aumento del pico sub-G1 en células RPMI-8402. 5 μM del mismo tratado durante 16 h conduce a un aumento de células apoptóticas en todas estas células, acompañado de una escisión tiempo-dependiente de procaspasa-8, procaspasa-3 y poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP). Esta sustancia química (5 μM) induce una desfosforilación tiempo-dependiente de IκBα y p65. Las células T-ALL tratadas con ella muestran translocación nuclear de FOXO3a y restauración de sus funciones, incluyendo el control de los niveles de expresión de p21^Cip1. [4] Inhibe la expresión inducida por TNFα tanto de ICAM-1 como de VCAM-1 en células endoteliales de vena umbilical humana con una IC50 de 5 μM. [5]

BMS-345541 inhibe eficazmente el crecimiento del tumor de melanoma de forma dosis-dependiente. Los ratones portadores de tumores tratados con 75 mg/kg de este compuesto muestran una inhibición eficaz del crecimiento de los tumores SK-MEL-5, A375 y Hs 294T en un 86 %, 69 % y 67 %, respectivamente, en comparación con los animales de control tratados solo con el vehículo.[3] Este compuesto administrado oralmente a dosis de 100 mg/kg, reduce la gravedad de la colitis inducida por sulfato de dextrano sódico en ratones con una relación de peso, puntuación clínica de colon, puntuación media de lesión y puntuación media de inflamación de 0,86 (frente a 0,77 del grupo vehículo), 1,0 (frente a 2,5 del grupo vehículo), 5,66 (frente a 8,52 del grupo vehículo), 6,82 (frente a 12,33 del grupo vehículo), respectivamente. [6] Esta sustancia química (100 mg/kg), cuando se administra por sonda oral en agua una vez al día a partir del momento de la primera inmunización con colágeno, inhibe los signos clínicos de la enfermedad en el modelo murino de CIA (0 frente a ~8 del grupo vehículo), acompañada de una reducción de la hinchazón de las patas. Reduce la puntuación acumulada de lesión por artritis de 4,4 a 0, acompañada de una menor degradación de las articulaciones tibiotarsales y una menor gravedad de la inflamación, la hiperplasia sinovial, la resorción ósea y la erosión del cartílago. No se observó ninguna lesión discernible en las articulaciones de los animales, que eran histológicamente indistinguibles de las de animales de control de la misma edad y libres de enfermedad. Este compuesto inhibe de forma dosis-dependiente el mensaje de IL-1β, mostrando los animales del grupo de dosis de 100 mg/kg niveles comparables a los de los animales de control libres de enfermedad. [7]

• Ensayos enzimáticos

  Los ensayos que miden la fosforilación catalizada por enzimas de GST-IκBα se realizan añadiendo la enzima (una concentración final de 0,5 μg/mL) a 30 ℃ a soluciones de 100 μg/mL de GST-IκBα y 5 μM de [³³P]ATP en 40 mM Tris HCl, pH 7,5, que contienen 4 mM MgCl₂, 34 mM de fosfato de sodio, 3 mM NaCl, 0,6 mM de fosfato de potasio, 1 mM KCl, 1 mM ditiotreitol, 3 % (p/v) de glicerol y 250 μg/mL de albúmina de suero bovino. La actividad específica de [³³P]ATP utilizada en el ensayo es de 100 Ci/mmol. Después de 5 min, las reacciones de quinasa se detienen mediante la adición de tampón de muestra Laemmli 2× y se tratan térmicamente a 90 ℃ durante 1 min. Las muestras se cargan luego en geles NuPAGE 10 % BisTris. Una vez completada la SDS-PAGE, los geles se secan en un secador de geles en placa. Las bandas se detectan luego utilizando un PhosphorImager 445Si, y la radioactividad se cuantifica utilizando el software ImageQuant. Bajo estas condiciones, el grado de fosforilación de GST-IκBα es lineal con el tiempo y la concentración de la enzima.

• Líneas celulares

  Metastatic human melanoma cells SK-MEL-5

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  3 days

• Método

  1×10⁵ cells per well are plated in six-well plates with 10% fetal bovine serum medium overnight to allow cell adhesion. Cells ae cultured in medium containing BMS-345541 for 72 hours of treatment. Cells are counted with a hemocytometer.

• Modelos animales

  Human melanoma xenografts SK-MEL-5

• Dosificaciones

  75 mg/kg

• Administración

  orally administered by gavage