BI 2536

BI 2536 bloquea las actividades de Plk2 y Plk3 en menor medida con IC50 de 3,5 nM y 9,0 nM, respectivamente. En células HeLa, este tratamiento con el compuesto en el rango de 10-100 nM conduce al bloqueo del reclutamiento de γ-tubulina y la fosforilación de Apc6 en los centrosomas mitóticos, la inhibición de la liberación de cohesina de los brazos cromosómicos, la inducción de husos monopolares, así como una serie de otros procesos mitóticos que se sabe que dependen de Plk1. Este tratamiento químico lleva a las células HeLa arrestadas en G2/M, posteriormente un pico de ADN sub-G1 indicativo de degradación del ADN y apoptosis, y fragmentos de PARP p85 clivados acumulados de manera dependiente de la concentración. Inhibe el crecimiento de un panel de 32 líneas celulares de cáncer humano con EC50 de 2-25 nM, mientras bloquea la proliferación de células hTERT-RPE1 de crecimiento exponencial, células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVECs) y células renales de rata normales (NRK) con EC50 de 12-31 nM. [1] La inhibición de Plk1 por este compuesto reduce el crecimiento y la viabilidad de las células de carcinoma tiroideo anaplásico (ATC) como CAL62, OCUT-1, SW1736, 8505C y ACT-1 con valores de EC50 de 1,4-5,6 nM. [2]

BI 2536 administrado i.v. una o dos veces por semana es altamente eficaz en diversos modelos de xenoinjertos con una tolerabilidad aceptable al inhibir la proliferación celular a través de un arresto mitótico y, posteriormente, la inducción de la muerte de células tumorales. La administración de este compuesto a 50 mg/kg una o dos veces por semana inhibe significativamente el crecimiento de xenoinjertos HCT 116 con T/C del 15% y 0,3%, respectivamente. Este tratamiento químico dos veces por semana también conduce a un excelente crecimiento tumoral en modelos BxPC-3 y A549 con T/C del 5% y 14%, respectivamente. [1]

• Ensayo de quinasa Plk1 in vitro

  La Plk1 humana recombinante (residuos 1-603) se expresa como proteína de fusión N-terminal, marcada con GST, con un sistema de expresión baculoviral y se purifica mediante cromatografía de afinidad con glutatión-agarosa. Los ensayos de actividad enzimática para Plk1 se realizan en presencia de BI 2536 diluido en serie con 20 ng de quinasa recombinante y 10 μg de caseína de leche bovina como sustrato. Las reacciones de quinasa se realizan en un volumen final de 60 μL durante 45 minutos a 30 °C (15 mM MgCl₂, 25 mM MOPS [pH 7,0], 1 mM DTT, 1% DMSO, 7,5 mM ATP, 0,3 μCi γ-³³P-ATP). Las reacciones se terminan mediante la adición de 125 μL de TCA al 5% helado. Después de transferir los precipitados a placas de filtro de celulosa de éster mixto Multi-Screen, las placas se lavan con TCA al 1% y se cuantifican radiométricamente. Se utiliza la curva dosis-respuesta para calcular el valor de IC50.

• Líneas celulares

  HeLa, A43, SKOV-3, HT-29, K562, A549, Saos-2, MCF7, HCT116, COLO 205, Hep G2, Raji and PC-3 cells, etc.

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tiempo de incubación

  24 and 72 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of BI 2536 for 24, and 72 hours. Cell growth is assessed by the measurement of Alamar Blue dye conversion in a fluorescence spectrophotometer. For determining the DNA content of the cultures, cell suspensions are fixed in 80% ethanol, treated for 5 minutes with 0.25% Triton X-100 in PBS, and incubated with 0.1% RNase and 10 μg/mL propidium iodide (PI) in PBS for 20 minutes at RT. Cell-cycle profiles are determined by flow cytometric analysis.

• Modelos animales

  Female BomTac:NMRI-Foxn1^nu mice injected subcutaneously with HCT 116, NCI-H460, or A549 cells

• Dosificaciones

  ~50 mg/kg

• Administración

  Injection i.v. once or twice per week